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miR-373下调转化生长因子βⅡ型受体表达抑制肝星状细胞活化

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中国组织工程研究 2022年第5期26卷 756-761页

作者：徐静严永敏蔡梦洁江苏大学附属医院检验科江苏省镇江市212013 江苏大学医学院江苏省镇江市212013 苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所江苏省苏州市215006

背景:肝星状细胞活化分泌大量胶原是肝纤维化进展的主要因素,miRNA在肝星状细胞活化、凋亡等方面发挥着重要作用,miR-373调控肝星状细胞胶原分泌的作用及机制尚不清楚。目的:探讨miR-373靶向调控转化生长因子βⅡ型受体在肝星状细胞胶... 详细信息

背景:肝星状细胞活化分泌大量胶原是肝纤维化进展的主要因素,miRNA在肝星状细胞活化、凋亡等方面发挥着重要作用,miR-373调控肝星状细胞胶原分泌的作用及机制尚不清楚。目的:探讨miR-373靶向调控转化生长因子βⅡ型受体在肝星状细胞胶原分泌中的作用。方法:(1)建立Bal b/c小鼠肝纤维化模型,Masson法测定肝组织胶原,采集小鼠血清样本,提取血清总RNA,qRT-PCR定量分析小鼠mmu-miR-291a-3p(人hsa-miR-373-3p的同源序列)水平。免疫组化检测肝组织转化生长因子βⅡ型受体和αSMA表达;(2)TargetScan软件预测miR-373的靶基因转化生长因子βⅡ型受体,采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-373调控转化生长因子βⅡ型受体启动子的活性;(3)用25,50 nmol/L miR-373 mimics转染人肝星状细胞(LX-2)过表达miR-373,并以转染随机miRNA序列做对照,采用Western blot和免疫荧光检测转化生长因子βⅡ型受体和成纤维细胞激活蛋白的蛋白表达。实验方案经江苏大学实验动物伦理委员会批准(批准号为UJS-IACUCAP-2020033127)。结果与结论:(1)健康对照组相比,肝纤维化组小鼠血清mmu-miR-291a-3p水平明显降低(P <0.001),肝组织胶原合成显著增加;(2)肝纤维化组织转化生长因子βⅡ型受体和αSMA共表达显著增加;(3)miR-373显著抑制了转化生长因子βⅡ型受体启动子的活性(P <0.01),miR-373过表达显著抑制LX-2的转化生长因子βⅡ型受体(P <0.05)和成纤维细胞激活蛋白(P <0.01)的蛋白表达;(4)结果说明,miR-373通过调控转化生长因子βⅡ型受体表达抑制肝星状细胞活化和肝组织胶原沉积。

关键词：肝纤维化 miRNA miR-373 转化生长因子βⅡ型受体 TGFβR2

N-myc下游调节基因对胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响及其机制研究

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中国现代医学杂志 2022年第12期32卷 39-44页

作者：白阳周洪兴姜玉严永敏江苏大学医学院江苏镇江212013 南京医科大学附属常州市第二人民医院检验科江苏常州213004

目的探究N-myc下游调节基因(NDRG1)对胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响,并分析可能的机制。方法体外培养人胰腺癌细胞系MZ-3262细胞,并分为空白对照组(细胞不做特殊处理)、pcDNANC组(细胞转染pcDNA-NC)、pcDNA-NDRG1组(细胞转染pcDNA-N... 详细信息

目的探究N-myc下游调节基因(NDRG1)对胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响,并分析可能的机制。方法体外培养人胰腺癌细胞系MZ-3262细胞,并分为空白对照组(细胞不做特殊处理)、pcDNANC组(细胞转染pcDNA-NC)、pcDNA-NDRG1组(细胞转染pcDNA-NDRG1)、通路抑制剂组[转染pcDNA-NDRG1后加入含终浓度为1 mmol/L磷脂肌醇3-激酶(PI3K)通路激活剂bpv的培养液];采用实时荧光定量聚合酶链反应检测NDRG1 m RNA的表达;CCK-8法检测细胞存活情况;划痕实验、Transwell实验分别检测细胞迁移、侵袭能力;Western blotting检测NDRG1、增殖及侵袭迁移相关蛋白[细胞增殖相关核抗原(PCNA)、E-钙黏附蛋白(E-Cadherin)、N-钙黏附蛋白(N-Cadherin)、波形蛋白(Vimentin)]及蛋白激酶B/转录激活因子3(Akt/STAT3)通路蛋白[PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、STAT3]的表达。结果与空白对照组、pcDNA-NC组比较,pcDNA-NDRG1组、通路激活剂组MZ-3262细胞NDRG1 mRNA和蛋白、E-Cadherin蛋白相对表达量升高(P<0.05),细胞存活率、侵袭细胞数、划痕愈合率、PCNA、N-Cadherin、Vimentin蛋白及p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-STAT3/STAT3相对表达量降低(P<0.05);但通路激活剂组MZ-3262细胞NDRG1 mRNA和蛋白、E-Cadherin蛋白相对表达量低于pcDNA-NDRG1组(P<0.05),细胞存活率、侵袭细胞数、划痕愈合率、PCNA、N-Cadherin、Vimentin蛋白及p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-STAT3/STAT3相对表达量高于pcDNA-NDRG1组(P<0.05)。结论过表达NDRG1表达可能通过抑制PI3K/Akt/STAT3通路活化,抑制胰腺癌MZ-3262细胞增殖、侵袭及迁移。

关键词：胰腺癌 N-myc下游调节基因细胞增殖侵袭迁移磷脂肌醇3-激酶/蛋白激酶B/转录激活因子3通路

超敏酶标术中快速免疫组化技术在临床工作中的应用

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系统医学 2023年第19期8卷 53-55,59页

作者：施洋严永敏镇江市第一人民医院病理科江苏镇江212000 江苏大学医学院检验医学系江苏镇江212013

目的研究超敏酶标术中快速免疫组化技术在临床工作中的应用。方法选取2022年2月—2023年5月镇江市第一人民医院诊治的162例术中肿瘤疑似患者为研究对象,所有研究对象均予以快速免疫组化检测,并以石蜡免疫组化法检测结果作为金标准。分... 详细信息

目的研究超敏酶标术中快速免疫组化技术在临床工作中的应用。方法选取2022年2月—2023年5月镇江市第一人民医院诊治的162例术中肿瘤疑似患者为研究对象,所有研究对象均予以快速免疫组化检测,并以石蜡免疫组化法检测结果作为金标准。分析不同检测方式肿瘤符合率等诊断效能。结果阳性定位指标符合率为92.68%(76/82);表达强度指标符合率为87.80%(72/82);阳性细胞百分比指标符合率为95.12%(78/82);组织背景指标符合率为85.37%(70/82);超敏酶标术中快速免疫组化法检测准确度为98.77%。结论在针对恶性肿瘤疾病进行术中检测时,选择超敏酶标予以快速免疫组化能够具有较高的符合率,表达更为准确,建议在术中冰冻诊断中作为重要的辅助诊断依据。

关键词：超敏酶标快速免疫组化石蜡免疫组化法恶性肿瘤术中冰冻诊断染色

经远端桡动脉入径在脑血管造影中的有效性、安全性及满意度研究

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中国全科医学 2023年第27期26卷 3378-3382页

作者：陆彬项崇袁雪松蔡高军魏文锋严永敏江苏大学附属武进医院、徐州医科大学武进临床学院神经外科江苏省常州市213000 江苏大学附属武进医院、徐州医科大学武进临床学院心血管内科江苏省常州市213000 江苏大学附属武进医院、徐州医科大学武进临床学院医学检验科江苏省常州市213000

背景脑血管造影在脑血管疾病的诊断中具有重要作用,近年来经远端桡动脉入径(dTRA)逐渐应用于脑血管造影,但目前关于其有效性、安全性的研究报道较少见。目的对比经桡动脉入径(TRA)与dTRA行脑血管造影的有效性、安全性及满意度。方法选取... 详细信息

背景脑血管造影在脑血管疾病的诊断中具有重要作用,近年来经远端桡动脉入径(dTRA)逐渐应用于脑血管造影,但目前关于其有效性、安全性的研究报道较少见。目的对比经桡动脉入径(TRA)与dTRA行脑血管造影的有效性、安全性及满意度。方法选取2020年1月—2022年6月在江苏大学附属武进医院神经外科住院并行脑血管造影的患者135例。根据脑血管造影入径分为TRA组(n=72)与dTRA组(n=63),分别采用TRA、dTRA完成脑血管造影。比较两组患者穿刺时间、脑血管造影时间、穿刺成功率、X线暴露时间、脑血管造影后3 d内穿刺点并发症及严重心脑血管事件发生情况、脑血管造影后24 h疼痛程度和满意度。结果dTRA组患者穿刺时间、脑血管造影时间长于TRA组,穿刺成功率低于TRA组(P0.05)。两组患者脑血管造影后3 d内均未出现严重心脑血管事件。dTRA组患者脑血管造影后24 h疼痛程度轻于TRA组,满意度高于TRA组(P<0.05)。结论与TRA行脑血管造影相比,dTRA行脑血管造影亦安全、有效,有利于减轻患者疼痛,提高患者满意度,可作为脑血管造影的备选入径之一,但其穿刺难度较高,穿刺时间较长,存在一定的“学习曲线”。

关键词：脑血管疾病脑血管造影术桡动脉远端桡动脉治疗结果安全

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肝硬化患者的临床肝功能生化检验效果研究

智慧健康 2023年第27期9卷 175-178页

作者：王惠琴严永敏张颖江苏大学附属武进医院/徐州医科大学武进临床学院检验科江苏常州213017

目的分析肝硬化患者的肝功能生化检验效果。方法抽取2018年1月—2022年12月江苏大学附属武进医院收治的肝硬化患者90例(观察组),另外,同时期收治健康体检人群90例(对照组),对两组受检者均给予肝功能生化检验,分析肝硬化患者与健康体检... 详细信息

目的分析肝硬化患者的肝功能生化检验效果。方法抽取2018年1月—2022年12月江苏大学附属武进医院收治的肝硬化患者90例(观察组),另外,同时期收治健康体检人群90例(对照组),对两组受检者均给予肝功能生化检验,分析肝硬化患者与健康体检者的肝功能生化检验指标。同时,对比不同肝功能分级患者的生化检验指标。结果观察组的总胆汁酸水平明显高于对照组,人血白蛋白、血清胆碱酯酶、血清总胆固醇水平均明显低于对照组(P<0.05)。观察组患者的人血白蛋白水平、总胆汁酸水平、血清总胆固醇水平,相比对照组明显更低(P<0.05)。结论对肝硬化患者而言,加强肝功能生化指标检验,便于了解病情进展情况,指导后续的疾病治疗。

关键词：肝功能生化检验肝硬化健康体检

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外泌体在肝脏疾病进展及诊疗中作用研究进展

临床检验杂志 2022年第6期40卷 444-450页

作者：杨苏丽张转马宇佳徐杨严永敏王亚南江苏大学医学院江苏镇江212013 苏州市立医院&南京医科大学附属苏州医院检验科江苏苏州215002

外泌体是细胞分泌到细胞外基质的纳米级囊泡。在双层膜的包裹下,其内部携带着蛋白质、DNA、mRNA和miRNA等生物分子。外泌体与多种肝脏疾病发生、发展均有着密切关系。在病理情况下,外泌体内特异性蛋白、miRNA均可作为检测靶点,为诊断和... 详细信息

外泌体是细胞分泌到细胞外基质的纳米级囊泡。在双层膜的包裹下,其内部携带着蛋白质、DNA、mRNA和miRNA等生物分子。外泌体与多种肝脏疾病发生、发展均有着密切关系。在病理情况下,外泌体内特异性蛋白、miRNA均可作为检测靶点,为诊断和治疗提供了新思路。该文主要对外泌体在肝脏疾病中的作用以及其临床应用价值作一简要概述。

关键词：外泌体肝脏疾病研究进展检测

肝细胞外泌体抑制小鼠非酒精性脂肪肝脂质沉积

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江苏大学学报（医学版） 2022年第4期32卷 332-337页

作者：武艳霜王岩金杨馥吉严永敏江苏大学医学院江苏镇江212013 江苏大学附属镇江三院肝病科江苏镇江212005

目的:探讨人肝细胞系LO2细胞来源的外泌体(exosomes derived from hepatocytes,LO2-Ex)对高脂肪饮食诱导的非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver diseases,NAFLD)小鼠肝脏脂质沉积的影响。方法:培养正常人肝细胞系LO2细胞,超速离心... 详细信息

目的:探讨人肝细胞系LO2细胞来源的外泌体(exosomes derived from hepatocytes,LO2-Ex)对高脂肪饮食诱导的非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver diseases,NAFLD)小鼠肝脏脂质沉积的影响。方法:培养正常人肝细胞系LO2细胞,超速离心法提取LO2-Ex。Nanosight纳米颗粒分析系统测定外泌体的粒径和浓度,透射电镜观察外泌体形态,免疫印迹法检测外泌体表面标志物。高脂肪饮食喂养雄性C57BL/6小鼠10周建立NAFLD小鼠模型,第11周连续尾静脉注射LO2-Ex 4周后收集肝组织,HE染色观察肝脏组织结构,计算肝脏指数(肝脏质量/净体重),油红O染色检测小鼠肝脏脂质沉积程度,天狼星红染色观察肝组织胶原沉积情况。结果:LO2-Ex的粒径为120 nm左右,具有外泌体特征性的脂质双层结构,表达外泌体特异蛋白CD9和TSG101,不表达Calnexin。与模型组相比,LO2-Ex组小鼠肝脏表面红润、细腻、有光泽。LO2-Ex能够改善NAFLD小鼠肝组织结构,提高小鼠肝脏指数。HE染色、油红O染色和天狼星红染色显示LO2-Ex减轻了肝组织的空泡变性、脂肪沉积和胶原沉积。结论:LO2-Ex可以抑制肝组织脂肪沉积,延缓小鼠NAFLD进展。

关键词：肝细胞外泌体非酒精性脂肪肝病空泡变性脂质沉积胶原沉积

人脐带间质干细胞来源的外泌体抑制肝窦内皮细胞毛细血管样改变

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江苏大学学报（医学版） 2022年第5期32卷 376-384页

作者：王晨王岩金杨馥吉严永敏谭友文江苏大学附属镇江三院肝病科江苏镇江212005 江苏大学医学院江苏镇江212013

目的:探讨人脐带间质干细胞来源的外泌体(mesenchymal stem cell derived exosomes,MSC-Ex)对肝窦内皮细胞(liver sinusoidal endothelial cell,LSEC)毛细血管样改变的影响。方法:从人脐带组织中分离培养间质干细胞,采用超速离心法提取... 详细信息

目的:探讨人脐带间质干细胞来源的外泌体(mesenchymal stem cell derived exosomes,MSC-Ex)对肝窦内皮细胞(liver sinusoidal endothelial cell,LSEC)毛细血管样改变的影响。方法:从人脐带组织中分离培养间质干细胞,采用超速离心法提取培养上清液中的MSC-Ex。采用透射电镜、纳米颗粒跟踪分析仪以及蛋白质免疫印迹对MSC-Ex进行形态和表征的鉴定。用TNF-α诱导建立LSEC血管化模型,并加入DIO荧光染料标记的MSC-Ex共培养,观察LSEC对MSC-Ex的摄取能力。采用qRT-PCR检测LSEC中促血管生成素-2(angiopoietin-2,Ang-2)、CD34的mRNA相对表达,采用蛋白质免疫印迹检测LSEC中Ang-2、CD34蛋白表达,采用小管形成实验检测LSEC的管腔形成能力。构建蛋氨酸、胆碱缺乏饮食(methionine and choline deficiency diet,MCD)诱导的ICR小鼠肝纤维化模型,然后尾静脉分别注射MSC-Ex(10 mg/kg)和100μL PBS,每3 d注射1次,共注射5次。采用天狼猩红染色及免疫组织化学染色分别观察肝组织胶原沉积及检测Ang-2蛋白表达。结果:蛋白质免疫印迹显示MSC-Ex高表达外泌体特征性标志物Alix、TSG101、CD63、CD9,透射电镜显示MSC-Ex为直径约100 nm的盘状囊泡,纳米颗粒跟踪分析仪显示其颗粒浓度约为3.4×10^(11)/mL。MSC-Ex可被LSEC摄取,并显著抑制TNF-α诱导的LSEC的管腔形成及Ang-2、血管内皮细胞标志CD34表达。天狼猩红染色和免疫组织化学染色显示,MSC-Ex可限制纤维化肝组织的胶原沉积和Ang-2蛋白表达。结论:人脐带MSC-Ex可在体内外抑制LSEC毛细血管样改变。

关键词：人脐带间质干细胞外泌体肝窦内皮细胞毛细血管样改变血管生成素-2

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实时定量PCR在干细胞及肿瘤研究中的应用

临床检验杂志 2005年第1期23卷 65-66,72页

作者：严永敏郝顺祖许文荣江苏大学医学技术学院江苏镇江212001

实时定量PCR(real-time quantitative PCR)技术实现了PCR从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点,已广泛用于生物医学及临床医学等多个领域.而在干细胞研究和肿瘤诊断的研究中,... 详细信息

实时定量PCR(real-time quantitative PCR)技术实现了PCR从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点,已广泛用于生物医学及临床医学等多个领域.而在干细胞研究和肿瘤诊断的研究中,国内外文献报道较少,本文就其中方法原理、研究进展及其在干细胞和肿瘤研究方面的应用作一简要综述.……

关键词：实时定量PCR 肿瘤研究干细胞研究 PCR污染临床医学肿瘤诊断生物医学 PCR) 特异性领域