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利用番茄果实特异启动子E8改造‘外源基因清除’的表达载体及转化金柑研究

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分子植物育种 2015年第10期13卷 2274-2279页

作者：谢玉明李益严佳文姚润贤 Alessandra Gentile 邓子牛湖南农业大学园艺园林学院长沙410128 国家柑橘改良中心长沙分中心长沙410128

利用"外源基因清除"技术(‘Gene-Deletor’),将外源基因从转基因金柑果实中彻底清除,可以达到用转基因作物生产出非转基因食品的目的。本研究利用引物pE8F和pE8R从樱桃番茄中克隆果实特异启动子E8,通过SalⅠ和SmaⅠ双酶切置换掉"外源基... 详细信息

利用"外源基因清除"技术(‘Gene-Deletor’),将外源基因从转基因金柑果实中彻底清除,可以达到用转基因作物生产出非转基因食品的目的。本研究利用引物pE8F和pE8R从樱桃番茄中克隆果实特异启动子E8,通过SalⅠ和SmaⅠ双酶切置换掉"外源基因清除"载体(pCambia-LF-polseed-FLP,简称Y-A)中的花粉、种子特异启动子PAB5,重新构造"外源基因清除"载体Y-A-E8,利用农杆菌EHA105介导转化实生态金柑,获得转化植株,并通过nptⅡ基因特异引物nptⅡ-F和nptⅡ-R PCR检测阳性转化植株。载体Y-A-E8 SalⅠ和SmaⅠ双酶切结果表明,E8启动子成功替换启动子PAB5,Y-A-E8经EHA105介导转化成功获得11株转化植株且PCR检测到6株为Y-A-E8转基因植株。研究结果可为"外源基因清除"技术在转基因金柑方面的应用提供参考。

关键词： “外源基因清除”技术果实特异启动子E8 载体改造金柑遗传转化

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利用小RNA测序技术检测贵州西番莲病毒

热带作物学报 2019年第8期40卷 1577-1584页

作者：严佳文袁启凤解璞王立娟马玉华王正媛贵州省农业科学院果树科学研究所贵州贵阳550006 罗甸县果业产业化发展办公室贵州罗甸550100

病毒病害是西番莲重要病害之一,明确病毒种类可为病害防治提供理论依据。本研究应用小RNA测序技术对6份疑似病毒侵染的西番莲叶片样本进行病毒种类鉴定,发现混合样本中含有黄瓜花叶病毒(Cucumbermosaicvirus,CMV)和夜来香花叶病毒(Telos... 详细信息

病毒病害是西番莲重要病害之一,明确病毒种类可为病害防治提供理论依据。本研究应用小RNA测序技术对6份疑似病毒侵染的西番莲叶片样本进行病毒种类鉴定,发现混合样本中含有黄瓜花叶病毒(Cucumbermosaicvirus,CMV)和夜来香花叶病毒(Telosma mosaic virus, TeMV)。应用RT-PCR分别扩增6份样本中2种病毒的外壳蛋白(coat protein, CP)基因序列,进一步证实6份样本中均含有CMV和TeMV。CMV的CP基因开放阅读框大小为657 bp,与已报道的其他分离物的一致性为82.3%~95.9%;TeMV的CP基因开放阅读框为816 bp,与其他分离物的一致性分别为87.8%~99.3%和87.8%~98.3%。上述结果表明,贵州西番莲中的病毒是CMV和TeMV的分离物,分别命名为CMV-GZ(CP基因登录号为MH623077)、TeMV-GZ1(MH623078)和TeMV-GZ2(MH623079)。

关键词：西番莲病毒小RNA测序鉴定

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紫果西番莲基因组调查及SSR特征分析

分子植物育种 2020年第24期18卷 8171-8177页

作者：严佳文解璞袁启凤马玉华廖仕琴贵州省农业科学院果树科学研究所贵阳550006 罗甸县果业产业化发展办公室罗甸550100

西番莲是中国南方地区重要的热带水果,富含多种生物活性成分,具有较高的开发价值。本研究对‘紫香1号’西番莲进行了基因组调查测序,总测序深度为134.52×,获得高质量数据200.94 Gb。基于K-mer分析,预测基因组大小约为1 501 Mb,重复序... 详细信息

西番莲是中国南方地区重要的热带水果,富含多种生物活性成分,具有较高的开发价值。本研究对‘紫香1号’西番莲进行了基因组调查测序,总测序深度为134.52×,获得高质量数据200.94 Gb。基于K-mer分析,预测基因组大小约为1 501 Mb,重复序列含量为76.11%,杂合度0.003%,GC含量42.82%。此外,在拼接的基因组序列中鉴定了202 272个SSR位点,其中含有单核苷酸重复基元的SSR位点有123 672个,占SSR总数的61.14%,其次是含有二核苷酸重复基元的SSR (53 951, 26.67%)和含有三核苷酸重复基元的SSR (18 712, 9.25%)。本研究结果为确定西番莲全基因组测序策略和SSR分子标记开发提供了理论依据和参考。

关键词：西番莲(Passiflora edulis) 基因组 SSR

火龙果开花调控转录因子基因HpSOC1的克隆与表达分析

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植物生理学报 2018年第10期54卷 1561-1568页

作者：严佳文解璞袁启凤肖图舰毛永亚马玉华贵州省农业科学院果树科学研究所贵阳550006

SOC1是拟南芥成花诱导过程中的关键基因之一,其表达产物能整合多条成花途径的调控信号。为揭示火龙果(Hylocereus polyrhizus) SOC1同源基因在光周期成花途径中的作用机制,以火龙果芽为试验材料,应用RACE技术克隆了SOC1同源基因,命名为H... 详细信息

SOC1是拟南芥成花诱导过程中的关键基因之一,其表达产物能整合多条成花途径的调控信号。为揭示火龙果(Hylocereus polyrhizus) SOC1同源基因在光周期成花途径中的作用机制,以火龙果芽为试验材料,应用RACE技术克隆了SOC1同源基因,命名为HpSOC1。其cDNA全长为1365bp,开放阅读框长度为651bp,编码216个氨基酸, GenBank登录号为MH230063。HpSOC1蛋白具有典型的MADS-box、K-box结构域和SOC1-MOTIF,属于MADS基因家族中的SOC1/TM3亚家族,无信号肽输出位点和跨膜螺旋区,定位于细胞核内,属于非分泌蛋白。基因表达分析结果显示, HpSOC1在茎、茎芽和花芽中的表达量显著高于根、花瓣和果皮;相比对照,光照处理8 d时, HpSOC1表达显著上调。推测HpSOC1可能在营养生长向生殖生长转变的过程中发挥作用。

关键词：火龙果光周期 SOC1同源基因克隆基因表达

转基因枳橙中GA20ox1与rol基因互作关系的研究

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中国农学通报 2011年第19期27卷 214-221页

作者：袁飞荣李芳蒋巧巧 Alessandra Gentile 严佳文邓子牛国家柑橘改良中心长沙分中心湖南农业大学园艺园林学院湖南省作物种质创新与资源利用重点实验室 Dipartimento Diortofloroarboricolturae Tecnologie Agroalimentari Catania University Catania 95123 Italy

为分析转rolABC基因枳橙GA20ox1基因与rol基因表达的互作关系,进一步阐释其矮化性状形成的分子机制。以转rol基因枳橙实生苗为试验材料,研究其对赤霉素的敏感反应,用荧光定量RT-PCR分析GA20ox1基因和rol基因的表达,并检测幼芽中过氧化... 详细信息

为分析转rolABC基因枳橙GA20ox1基因与rol基因表达的互作关系,进一步阐释其矮化性状形成的分子机制。以转rol基因枳橙实生苗为试验材料,研究其对赤霉素的敏感反应,用荧光定量RT-PCR分析GA20ox1基因和rol基因的表达,并检测幼芽中过氧化物酶活性和植物内源激素含量的变化。结果表明转rol基因枳橙既不属于GA缺陷型,也不属于GA不敏感型,喷施GA3能促进其茎伸长生长,但恢复不到野生型水平,幼芽中IAA(P<0.01)、GA1和GA4(P<0.05)显著降低,POD酶活性显著提高(P<0.01)。转rol基因枳橙幼芽中GA20ox1基因mRNA水平相比对照显著下调(P<0.01)。B、D系与野生型嫩茎中无明显差异,B、D系老叶中明显降低,E系中嫩茎和老叶中均明显增加。B、D和E系嫩叶中GA20ox1基因转录表达均较野生型高。在幼芽、嫩茎中,rolC基因与GA20ox1表达负相关。rol基因通过在幼芽中的高表达下调了GA20ox1基因转录表达,进而抑制了活性GAs在幼芽中的合成,顶端分生组织较低量的活性GAs限制植物茎伸长,在转rolABC基因枳橙矮化性状建成中发挥重要作用。

关键词：枳橙 rolABC基因 GA20ox1基因基因表达植物激素矮化机理

基于果实品质主成分分析的‘黄金百香果’栽培架式评价

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中国果树 2021年第1期 22-27页

作者：袁启凤陈楠严佳文李仕品韩秀梅马玉华贵州省农业科学院果树科学研究所贵阳550006

通过比较在双层架、A形架、篱壁架、棚架、V形架、Y形架和T形架等栽培模式下‘黄金百香果’的果实品质,探究不同栽培架式对‘黄金百香果’果实品质的影响,为筛选适宜‘黄金百香果’的栽培架式提供理论依据。结果表明:‘黄金百香果’在7... 详细信息

通过比较在双层架、A形架、篱壁架、棚架、V形架、Y形架和T形架等栽培模式下‘黄金百香果’的果实品质,探究不同栽培架式对‘黄金百香果’果实品质的影响,为筛选适宜‘黄金百香果’的栽培架式提供理论依据。结果表明:‘黄金百香果’在7种栽培架式间的部分果实外观指标(单果重、纵横径、果形指数、可食率、果皮厚度、L值、a值、b值)和部分内在品质指标(可溶性糖含量、可滴定酸含量、维生素C含量、可溶性固形物含量、糖酸比和固酸比)呈显著差异;相关性分析结果表明,7种栽培架式间的‘黄金百香果’的L值与a值、糖酸比与固酸比呈极显著正相关;主成分分析结果表明,篱壁架、A形架、棚架种植下的‘黄金百香果’果实品质综合表现优于Y形架、V形架、双层架和T形架,其中篱壁架种植的果实综合表现最佳。

关键词：百香果 ‘黄金百香果’ 果实品质栽培架式主成分分析

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柑橘内参基因的筛选及其表达稳定性分析

柑橘内参基因的筛选及其表达稳定性分析

火龙果节律钟输出基因HpGI的克隆与表达分析

中国园艺学会2010年学术年会

作者：严佳文袁飞荣龙桂友覃磊邓子牛湖南农业大学园艺园林学院国家柑橘改良中心长沙分中心湖南省作物种质创新与资源利用重点实验室

定量PCR(qPCR)是低丰度基因表达分析的常用方法,而要得到准确的数据分析结果,选择稳定表达的内参基因尤为重要。理想的内参基因应是在各种实验环境和影响因子作用下,在不同基因型和不同组织中恒定或相对稳定表达。本研究旨在筛选柑橘中... 详细信息

定量PCR(qPCR)是低丰度基因表达分析的常用方法,而要得到准确的数据分析结果,选择稳定表达的内参基因尤为重要。理想的内参基因应是在各种实验环境和影响因子作用下,在不同基因型和不同组织中恒定或相对稳定表达。本研究旨在筛选柑橘中能稳定表达的看家基因,为柑橘基因表达分析中内参基因的选择提供参考和依据。

关键词：柑橘内参基因筛选稳定性评价

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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热带作物学报 2020年第7期41卷 1298-1304页

作者：肖图舰马玉华袁启凤解璞毛永亚严佳文廖仕琴贵州省农业科学院果树科学研究所贵州贵阳550006 罗甸县果业产业化发展办公室贵州罗甸550100

节律钟输出基因GIGANTEA通过光周期途径促进植物开花,为研究火龙果GIGANTEA同源基因功能,应用RT-PCR克隆获得该基因的开放阅读框序列,命名为Hylocereus polyrhizus GIGANTEA(HpGI),GenBank登录号为MK609546。序列分析结果表明,HpGI开放... 详细信息

节律钟输出基因GIGANTEA通过光周期途径促进植物开花,为研究火龙果GIGANTEA同源基因功能,应用RT-PCR克隆获得该基因的开放阅读框序列,命名为Hylocereus polyrhizus GIGANTEA(HpGI),GenBank登录号为MK609546。序列分析结果表明,HpGI开放阅读框长度为3537 bp,编码1178个氨基酸。系统进化分析显示,HpGI与甜菜BvGI、菠菜SoGI、丝石竹GpGI的分子进化距离较近。预测HpGI定位于细胞核,无信号肽和跨膜螺旋结构域,属于非分泌蛋白。基因表达分析结果表明,HpGI基因在茎和花芽中的表达量显著高于茎芽、果皮和根;相比对照,延长光周期处理8 d时,其表达量显著上调。推测HpGI基因可能通过光周期途径促进火龙果开花。

关键词：火龙果 GIGANTEA同源基因克隆表达分析

不同架式栽培对台农1号百香果果实品质和产量的影响

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南方农业学报 2020年第7期51卷 1576-1583页

作者：袁启凤陈楠严佳文李仕品韩秀梅马玉华贵州省农业科学院果树科学研究所贵阳550006

【目的】探究不同架式栽培对台农1号百香果果实品质和产量的影响,为筛选适宜台农1号百香果的架式模式提供参考依据。【方法】采用酸碱滴定、2,6-二氯靛酚滴定和蒽酮比色等方法对7种不同架式下台农1号百香果的果实品质进行对比研究,分析... 详细信息

【目的】探究不同架式栽培对台农1号百香果果实品质和产量的影响,为筛选适宜台农1号百香果的架式模式提供参考依据。【方法】采用酸碱滴定、2,6-二氯靛酚滴定和蒽酮比色等方法对7种不同架式下台农1号百香果的果实品质进行对比研究,分析果实单果重、纵径、横径、果形指数、果皮厚度、可食率、种子数、果皮明度值(L^*)、红绿值(a^*)和黄蓝值(b^*)等外观指标,及可溶性总糖、可滴定酸、可溶性固形物、Vc、糖酸比和固酸比等内在生理指标,产量取高、中、低小区平均值,并对指标进行方差分析和主成分分析。【结果】不同架式栽培下台农1号百香果的单果重、果实纵径和横径、果形指数、可食率及果皮厚度均差异不显著(P>0.05);其中,果形指数在1.08~1.10,近圆形;Y形架栽培的果皮L^*、a^*和b^*值较其他架式高,分别为30.36、17.65和5.89;V形架栽培的可食率最高,达47.03%,果皮最薄,为0.54 cm;A形架的种子数明显低于其他架式;双层架和篱壁架的产量显著高于其他架式栽培(P篱壁架>T形架>V形架>Y形架>棚架>A形架。不同架式栽培的果实可溶性固形物、可溶性总糖、维生素C、糖酸比及固酸比等内在品质指标均表现出一定的差异性。其中,A形架的果实可滴定酸含量显著高于其他架式;Y形架果实糖酸比和可溶性总糖含量显著高于其他架式;棚架的固酸比和Vc含量显著高于其他架式;篱壁架的果实可溶性固形物含量显著高于其他架式。主成分分析将所检测的17个指标综合为5个特征根大于1的主成分,累计解释方差为94.965%,能代表原17个指标性状的绝大部分信息,不同架式因子得分排序为V形架>Y形架>篱壁架>A形架>双层架>T型架>棚架。【结论】台农1号百香果适应性强,篱壁架的栽培模式简单易操作。根据贵州省地形、环境条件、架材和生产成本,因地制宜种植台农1号,并配套篱壁架栽培技术的管理,对推动贵州百香果产业跨越式发展具有重要意义。

关键词：百香果台农1号果实品质产量主成分分析