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人工抗原递呈细胞体外激活肝癌患者外周血CD8+T淋巴细胞的研究

人工抗原递呈细胞体外激活肝癌患者外周血CD8+T淋巴细胞的研究

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2011年长江三角洲中医肝病协作组学术会议暨浙江省中医药学会肝病分会学术年会

作者：夏士珊向晓星龚卫娟扬州大学医学院苏北人民医院消化内科扬州大学医学院免疫教研室

背景和目的:肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是最常见的恶性肿瘤之一,预后极差。对于小肝癌,手术无疑是治疗的最有效手段,但手术之后几乎难以避免转移和复发;而就诊时已有转移的进展期肝癌,传统方法的疗效更是有限。近年来随着... 详细信息

背景和目的:肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是最常见的恶性肿瘤之一,预后极差。对于小肝癌,手术无疑是治疗的最有效手段,但手术之后几乎难以避免转移和复发;而就诊时已有转移的进展期肝癌,传统方法的疗效更是有限。近年来随着分子生物学、肿瘤免疫学和基因工程技术的发展,以肿瘤免疫治疗(immunotherapy)为代表的肿瘤生物治疗(biotherapy)作为综合治疗中重要的部分为HCC的治疗带来转机。肿瘤的过继免疫治疗(Adoptiveimmunotherapy,AIT)一直是肿瘤生物治疗研究中最为活跃的一个领域,向肿瘤患者转输具有抗肿瘤活性的免疫细胞(特异性的和非特异性的)直接杀伤肿瘤或激发机体免疫反应杀伤肿瘤细胞,达到治疗肿瘤的目的。人工抗原递呈细胞(artificial antigen presentation cell,aAPC)体外活化CTL细胞时具有简化操作流程、重复性好、成本低的优点,而且近年来不断产生令人鼓舞的应用前景。探讨该新型过继免疫疗法对肝癌细胞的作用机制,为CTL细胞进一步临床应用提供理论依据。方法:分离肝癌患者外周血单个核细胞,用磁珠分选法分离出CD8T细胞,取培养对数期的K32/4-IBBL/CD86细胞用丝裂霉素C处理。将两种细胞按不同比例混合培养,分别观察K32/4-IBBL/CD86细胞对CD8T细胞活化和增殖能力,用流式细胞仪检测CTL细胞分泌细胞因子INF-γ的能力及外周血PMBC经混合培养后CD3CD4及CD3CD4与CD3CD8比例变化;用MTT法检测CTL细胞杀伤率。结果:结果发现肝癌患者CD8T细胞经K32/4-IBBL/CD86细胞刺激后,CD8T细胞的增殖能力明显增强,与对照组相比,刺激1、8、15天后增殖能力提高3倍;活化CD8T细胞分泌INF-γ的能力与对照细胞相比明显增强(P<0.05);体外诱导扩增的CTL细胞可以杀伤人肝癌细胞株BEL7402和自体肝癌细胞,而且随着效靶比增强,杀伤作用增强。经活化的CTL细胞杀伤人肝癌细胞株BEL7402和自体肝癌细胞能力较无aAPC刺激活化CD8T强,二者比较,(P<0.05),结果有差异。不同比例混合培养所得的CTL细胞杀伤率不同,按1:1混合培养所得的CTL细胞杀伤率最高,与其他组比较,(P<0.01),结果有显著差异。结论:本研究结果表明人工抗原递呈细胞K32/4-IBBL/CD86细胞可以在体外高效活化肝癌患者CD8T淋巴细胞,促进CD8T细胞增殖和分裂,上调INF-γ分泌,有希望用来体外刺激肝癌患者CD8T淋巴细胞活化,从而在肝癌过继免疫治疗中发挥作用。

关键词：人工抗原递呈细胞肝癌激活 CD8+T淋巴细胞

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八珍汤治疗封闭抗体低下型复发性流产的临床疗效观察

八珍汤治疗封闭抗体低下型复发性流产的临床疗效观察

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2011年浙江省中医药学会妇科分会学术年会暨中西医结合防治生殖障碍疾病高级培训班

作者：陈赟章勤杭州市中医院

目的观察以八珍汤为主的中药治疗封闭抗体低下型复发性流产(Recurrent Spontaneous Abortion,RSA)的临床疗效,并与丈夫外周血淋巴细胞免疫治疗(以下简称"免疫治疗")相比较,探讨其能否为RSA患者提供新的治疗选择。方法选取杭州市中医院... 详细信息

目的观察以八珍汤为主的中药治疗封闭抗体低下型复发性流产(Recurrent Spontaneous Abortion,RSA)的临床疗效,并与丈夫外周血淋巴细胞免疫治疗(以下简称"免疫治疗")相比较,探讨其能否为RSA患者提供新的治疗选择。方法选取杭州市中医院中医妇科门诊收集的封闭抗体低下的RSA患者共40例,按照其丈夫血是否可以提供免疫治疗(体检是否合格)分为两组:一组为中药组,共18例,其丈夫体检不合格,为乙肝病毒携带者,给予八珍汤为主的中药治疗;另一组为对照组,共22例,其丈夫体检合格,给予淋巴细胞免疫治疗。治疗3个月后复查两组各项封闭抗体值(抗CD3-BE、抗CD4-BE及抗CD8-BE),比较治疗前后两组封闭抗体值及转阳率、患者妊娠率等。结果中药组与对照组的各项封闭抗体指标均有不同程度地提高。两组相比治疗后中药组各项封闭抗体的上升具有统计学差异(P0.05)。治疗前后中药组抗CD4-BE、抗CD8-BE转阳率较对照组高,而抗CD3-BE转阳率低于对照组;经x检验后,除抗CD8-BE转阳率外,其余指标治疗前后无统计学差异(P>0.05)。两组妊娠率无明显统计学差异(P>0.05)。结论与淋巴细胞免疫治疗相比,以八珍汤为主的中药对封闭抗体低下型的RSA患者的临床疗效更为显著(P<0.05),其中对抗CD8-BE的转阳率提高效果最好(P<0.01);八珍汤为主的中药治疗可以为因体质因素(如肝炎病毒携带者)无法进行免疫治疗或免疫治疗疗效不佳的封闭抗体低下型RSA患者提供新的治疗选择。

关键词：复发性流产封闭抗体八珍汤主动免疫疗法

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动物模型、造血干/祖细胞及分子机制系列研究用于开发中药5类新药派能达胶囊治疗血细胞减少症的成效

动物模型、造血干/祖细胞及分子机制系列研究用于开发中药5类新药...

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2011年浙江省中医药学会血液病分会学术年会暨国家中医临床研究基地血液病研究2011高峰论坛暨国家级继续教育中西医结合血液病新进展学习班

作者：高瑞兰苗青马逢顺肖鲁伟林筱洁许家鸾周郁鸿尹利明金锦梅王京霞宋康黄琦陈华王潇余潇苓钱煦岱陈小红倪桂宝浙江中医药大学附属第一医院

目的:对免疫性血小板减少症、再生障碍性贫血、白细胞减少症等血细胞减少症,常用药物强的松、雄激素、免疫抑制剂等疗效不够理想,或虽有效,但继续或减量后失效,且伴诸多不良反应,而疗效可靠的中成药品种很少,故迫切需要研发安全有效的...

目的:对免疫性血小板减少症、再生障碍性贫血、白细胞减少症等血细胞减少症,常用药物强的松、雄激素、免疫抑制剂等疗效不够理想,或虽有效,但继续或减量后失效,且伴诸多不良反应,而疗效可靠的中成药品种很少,故迫切需要研发安全有效的中药新药。在前期医院制剂升血灵胶囊(人参总皂苷),临床应用15年,疗效良好而无明显副反应。单用治疗ITP、再障和白细胞减少症的有效率分别为85.6%、69.7%和77.4%的基础上,进一步分离出人参二醇组皂苷,研制成派能达胶囊。方法和背景:1.项目组由实验血液学研究人员、药师和临床医师等二十余人组成,经过十八年努力,从提取分离中药有效成分→生物学活性筛选→制备工艺、成分分析→血液病动物模型→造血干/祖细胞→基因转录调控→信号途径、DNA甲基化、微小RNA、功能蛋白→中药新药的临床前研究。发明专利被授权,先后发表论文35篇,获省级成果奖3项,在我省中医药研究领域首次获省科技成果一等奖。采用生物学活性(与疗效密切相关)筛选与制备工艺相结合的先进方法,创新性地建立制备工艺。完成共23项实验和资料包括①药学研究:工艺的选择和优化、从小试到中试规模的制备、成分的定性定量分析、质量标准、稳定性试验等;②药效学研究:动物模型、造血干/祖细胞和分子作用机制等;③毒理学研究:急性、慢性毒性和三致试验;④设计临床研究等。3.引进合作方澳大利亚新南威尔士大学的先进技术,建立血液病中药现代化研究体系,浙江省政府授予澳方***教授国际科技合作奖,表彰他16年来对我省科技合作事业做出的杰出贡献。我方先后20余人次到澳合作研究,交流及培训,澳方13人次来我院讲学、指导和解决技术难题。应邀在澳洲报告血液病中药新药的研发,引起很大反响,受到高度赞扬。结果:1.2010年成功获得国家药监局中药5类新药临床试验批件2项。①派能达胶囊(2010L00856);②人参二醇组皂苷提取物(2010L00857)。制备工艺科技含量高,成分含量明确,主含5个人参皂苷单体,总量达到80%,高于国家药监局中药5类新药有效部位要求50%的标准。2.有效地治疗多种血细胞减少症动物模型,既能促进造血,又有调节免疫的双重功效,且分子作用机制明确。①有效升高ITP小鼠、大鼠模型的血小板计数,减少输入抗体对血小板的破坏。②对免疫型再障小鼠的疗效明显,促进骨髓造血祖细胞增殖而升高血小板和白细胞数,恢复CD4/CD8细胞比值。③改善白消安所致再障小鼠的骨髓抑制,加快造血功能的恢复。④有效预防和治疗化疗、放疗所致小鼠骨髓抑制血细胞减少,减轻化疗或辐射反应,促进造血祖细胞增殖,升高白细胞和血小板数。⑤促进人骨髓红系、粒系和巨核系造血祖细胞增殖,集落提高率大于40%;诱导CHRF-288和Meg-01原始巨核细胞分化作用显著,多种分化标记的阳性细胞率均明显增高。⑥上调造血细胞多种转录调控蛋白的表达,并诱导MAPK信号传递途径的多种蛋白激酶的作用。⑦抑制促凋亡相关蛋白的表达,而减少造血细胞的异常凋亡。3.作为技术秘密成功转让给省内企业,形成结构合理的创新团队,建立产学研用相结合模式,共同完成Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期临床试验。并设计生产用大孔树脂分离中药成分的设备,指导企业产业化生产GMP合格样品。结论:预期治疗上述血液病安全有效,所需剂量小、服用方便而无明显毒副反应,可与西药互补而提高疗效,减少或部分代替强的松、雄激素和免疫抑制剂而减少其毒副反应。体会是创新中药研究的最终目标是成为产品,具有自主知识产权,其疗效良好、副作用小,及质量易控制等方面必须优于同类药物。

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