肿瘤相关成纤维细胞的自噬通量与多发性骨髓瘤血管生成的关系及机制
作者单位：郑州大学第一附属医院
会议名称：《2024中国肿瘤标志物学术大会暨CACA整合肿瘤学高峰论坛暨第十七届肿瘤标志物青年科学家论坛暨中国肿瘤标志物产业创新大会》
会议日期：2024年
学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学]
关 键 词：自噬 多发性骨髓 肿瘤相关成纤维细胞 血管生成 肿瘤微环境
摘 要：目的:多发性骨髓(MM)第二大常见的血液系统恶性肿瘤,其疾病的进展与血管生成密切相关。研究表明肿瘤微环境中的肿瘤相关成纤维细胞(CAF)与肿瘤的增殖、迁移、侵袭以及耐药密切相关。在前期研究的基础上,我们以CAF的自噬为切入点,进一步研究体内外条件下,抑制或激活CAF自噬与MM血管生成的关系及其可能机制,为临床通过阻断血管形成,进而治疗肿瘤提供新的理论依据。材料与方法:1.通过Ficoll密度梯度离心法从MM组织标本中分离、培养并鉴定CAF;从营养不良性贫血患者骨髓活检组织标本中分离、培养并鉴定正常成纤维细胞(NF);通过Western blot、免疫荧光检测CAF标志蛋白α-SMA、FAP、FSP、Vimentin,对分离的CAF进行鉴定。2.通过Western blot、GFP-RFP-LC3斑点化实验以及吖啶橙染色等实验方法,检测NF和CAF的自噬通量差异。3.体外使用骨髓瘤上清诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为肿瘤相关内皮细胞(MMEC),并对其标志物以及增殖、迁移、侵袭、成管能力进行检测。4.使用3-甲基腺嘌呤或雷帕霉素,抑制或激活CAF的自噬,Western blot检测各组LC3B、Beclin1、BNIP3及CTSB的表达;并收集CAF上清作为条件培养基培养MMEC,鬼比环肽染色观察各组MMEC的细胞骨架以及侵袭性伪足的形态和数量;通过CCK8增殖实验、Transwell侵袭实验、划痕实验、小管形成实验观察CAF上清对各组MMEC的增殖、迁移和成管能力的影响。*** blot检测各组细胞中AMPK、p-AMPK、mTOR、p-mTOR、HIF-1α、VEGF-A的表达。5.分组构建裸鼠MM移植瘤模型,应用免疫组织化学方法检测各组MM移植瘤组织中CD34,标记血管内皮细胞,计算MVD值,观察CAF自噬体内对移植瘤血管形成的影响;通过Western blot检测移植瘤模型中AMPK、p-AMPK、mTOR、p-mTOR、HIF-1α、VEGF-A的表达。结果:1. MM患者样本中的CAF比正常人NF的自噬通量更高,且CAF的高水平自噬可增强MMEC的增殖、迁移、侵袭和成管能力。2.激活CAF自噬可进一步促进MMEC增殖、迁移、侵袭和成管能力;抑制CAFs自噬可降低MMEC增殖、迁移、侵袭和成管能力。3.自噬通路的激活或抑制,会调控HIF-1α、VEGFA的表达。4.体内激活CAF自噬可促进裸鼠MM移植瘤组织中的血管生成加速肿瘤生长,而抑制CAF自噬可减少裸鼠MM移植瘤组织中的血管生成延缓肿瘤生长。结论:1.骨髓瘤相关成纤维细胞有更高的自噬通量,其高通量自噬可促进多发性骨髓瘤的血管生成。2.激活骨髓瘤相关成纤维细胞的自噬可进一步促进骨髓瘤血管生成及肿瘤进展;抑制骨髓瘤相关成纤维细胞的自噬可减少骨髓瘤血管生成,延缓肿瘤进展。