蛋白激酶C对运动预处理不同保护时期中心肌ATP敏感钾通道亚基kir6.2和SUR2A表达影响的研究
作者单位：江苏师范大学
会议名称：《第十二届全国体育科学大会》
会议日期：2022年
学科分类：0403[教育学-体育学] 040302[教育学-运动人体科学(可授教育学、理学、医学学位)] 04[教育学]
关 键 词：蛋白激酶C 运动预处理 心肌ATP敏感钾通道 kir6.2 SUR2A
摘 要：研究目的:运动预处理(exercise preconditioning,EP)是一种通过大强度间歇运动诱导心肌产生保护效应的运动方式,EP心肌保护效应分为早期保护效应(EEP)和晚期保护效应(LEP)两种。本研究主要探讨在EP心肌保护效应不同保护时期中蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)对心肌ATP敏感钾通道(ATP-sensitive potassium channels,KATP channels)亚基内向整流钾通道6.2(kir6.2)和磺酰脲受体2A(SUR2A)表达调控的影响。研究方法:健康雄性SD大鼠48只,随机分为对照组(C组)、力竭运动组(EE组)、早期运动预处理组(EEP组)、PKC抑制剂+早期运动预处理组(CHE+EEP)、晚期运动预处理组(LEP组)和PKC抑制剂+晚期运动预处理组(CHE+LEP)。大强度跑台运动建立EP模型,力竭跑台运动致大鼠运动性心肌损伤。在建模结束后30min和24h之内,进行腹腔麻醉取材,同时使用PKC抑制剂白屈菜赤碱(CHE)阻断心肌KATP通道,揭示在EP心肌保护效应中PKC对kir6.2和SUR2A表达调控的影响。用原位杂交方法观察kir6.2 mRNA和SUR2A mRNA的分布变化,用实时荧光定量PCR方法检测kir6.2m RNA和SUR2Am RNA的表达变化,用免疫荧光组织化学方法观察kir6.2和SUR2A蛋白表达分布变化,采用免疫印迹方法检测kir6.2和SUR2A蛋白的表达变化。研究结果:3.1原位杂交及实时荧光定量PCR结果C组心肌kir6.2和SUR2A原位杂交信号呈深棕褐色,于心肌细胞胞浆中颗粒状弥散分布。CHE+EEP组kir6.2原位杂交信号较EEP组减弱,CHE+EEP组SUR2A原位杂交信号较EEP组无明显变化。CHE+LEP组kir6.2原位杂交信号较LEP组有减弱趋势,CHE+LEP组SUR2A原位杂交信号较LEP组有增强趋势。和EEP组相比,CHE+EEP组kir6.2 mRNA表达水平明显下降(P0.05)。和LEP组相比,CHE+LEP组kir6.2m RNA表达水平呈下降趋势(P0.05),CHE+LEP组SUR2A mRNA表达水平呈升高趋势(P0.05)。从Kir6.2mRNA和SUR2Am RNA表达变化趋势比较可以看出,与EEP组相比,CHE+EEP组Kir6.2m RNA表达变化趋势是下降的,而SUR2Am RNA表达变化趋势不明显。与LEP组相比,CHE+LEP组Kir6.2mRNA和SUR2AmRNA表达变化趋势是相反的,Kir6.2mRNA表达降低,而SUR2Am RNA表达升高。3.2免疫荧光组织化学及免疫印迹检测结果C组心肌kir6.2和SUR2A免疫荧光染色分别呈亮绿色和亮红色,在心肌纵切面上,kir6.2和SUR2A免疫荧光阳性产物呈规则的条纹状主要集中分布于心肌细胞表面。CHE+EEP组kir6.2免疫阳性反应较EEP组增强,CHE+EEP组SUR2A免疫阳性反应较EEP组减弱。CHE+LEP组kir6.2免疫阳性反应较LEP组有减弱趋势,CHE+LEP组SUR2A免疫阳性反应较LEP组增强。与EEP组相比,CHE+EEP组心肌kir6.2蛋白表达水平明显升高(P0.05),CHE+LEP组SUR2A表达水平明显升高(P0.05)。从Kir6.2和SUR2A蛋白表达变化趋势比较可以看出,与EEP组相比,CHE+EEP组的Kir6.2和SUR2A蛋白表达变化趋势是相反的,Kir6.2蛋白表达升高,而SUR2A蛋白表达降低。与LEP组相比,CHE+LEP组Kir6.2和SUR2A蛋白表达变化趋势也是相反的,不过,此时Kir6.2蛋白表达降低,而SUR2A蛋白表达升高。研究结论:蛋白激酶C调控了运动预处理早、晚期保护效应中心肌ATP敏感钾通道亚基kir6.2和SUR2A的表达,但是,在早期保护效应中,蛋白激酶C分别引起了kir6.2和SUR2A表达的升高和降低,而在晚期保护效应中,蛋白激酶C分别引起了kir6.2和SUR2A表达的降低和升高。在运动预处理早、晚期不同的心肌保护效应中,蛋白激酶C对kir6.2和SUR2A表达调控影响是相反的,这提示,在运动预处理早、晚期保护效应中,蛋白激酶C对心肌ATP敏感钾通道亚基kir6.2和SUR2A表达调控影响具有互补效应。