甜菜孢囊线虫SCAR快速分子检测技术研究
作者单位：中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室 新疆农业科学院植物保护研究所农业部西北荒漠绿洲作物有害生物综合治理重点实验室农业部库尔勒作物有害生物科学观测实验站 新疆维吾尔自治区新源县农业技术推广站
会议名称：《中国植物保护学会2019年学术年会》
会议日期：2019年
学科分类：09[农学] 0904[农学-植物保护] 090401[农学-植物病理学] 090402[农学-农业昆虫与害虫防治]
基 金：公益性行业农科科研专项(201503114) 新疆自治区科支援疆项目(2017E0253) 新疆高层次人才引进项目 国家重点研发计划(2016YFC1201200)
摘 要：甜菜孢囊线虫（Heterodera schachtii Schmidt）是全世界重要检疫性有害生物。1850年首次在德国报道,到目前为止,已在美洲、欧洲、亚洲等50多个国家或地区有分布,包括我国在内的22个国家将其列为检疫对象。甜菜孢囊线虫是甜菜上危害最严重的病原生物之一,可导致甜菜产量损失25%～50%,在欧洲每年的经济损失已经超过了9 000万欧元,严重威胁着当地甜菜生产和制糖业。本研究以甜菜孢囊线虫和近缘种孢囊线虫DNA为模板,以RAPD随机引物进行PCR扩增。结果表明,采用OPA06随机引物能够特异的从甜菜孢囊线虫中扩增出长度为1 000bp左右的条带,克隆测序后,在Genbank数据库中进行Blast比对,未发现同源的序列。在此基础上,设计出针对甜菜孢囊线虫的SCAR特异性引物（HSF1和HSR1）,能够快速的从甜菜孢囊线虫DNA中扩增出922bp的特异性条带,灵敏度检测发现,本研究设计的甜菜孢囊线虫SCAR分子标记的最低检出阈值为1/40 000个孢囊,1/320头2龄幼虫和0.001ng的甜菜孢囊线虫基因组DNA,特异性检测发现,该检测方法能够有效地将甜菜孢囊线虫和大豆孢囊线虫、禾谷孢囊线虫、菲利普孢囊线虫、宽阴门孢囊线虫、旱稻孢囊线虫、玉米孢囊线虫、十字花科孢囊线虫、爱沙尼亚孢囊线虫、仙人掌皮线虫等近源种进行有效的区分,具有极高的特异性,该检测技术的开发将为甜菜孢囊线虫快速准确的诊断提供有力的技术支撑。