基于日本血吸虫SEA纳米抗体的胶体金免疫层析技术的初步研究
作者单位：浙江省医学科学院寄生虫病研究所
会议名称：《第十一届全国寄生虫学青年工作者学术研讨会》
会议日期：2018年
学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学]
基 金：省部共建项目(WKJ-ZJ-1405) 浙江省科技计划项目(2017F30002) 浙江省科技计划项目(2015F50066)
关 键 词：日本血吸虫 虫卵抗原 纳米抗体 胶体金免疫层析方法
摘 要：目的:建立基于纳米抗体的检测日本血吸虫感染的胶体金免疫层析技术。方法:将已经通过噬菌体文库筛选得到的两株纳米抗体的质粒,在枯草芽孢杆菌中表达,得到具有活性的抗体蛋白(VHH-48、VHH-52)并以NI-NTA亲合层析纯化。以柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,标记VHH-48和VHH-52抗体蛋白并制备金标垫,分别用日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)和羊抗鼠Ig G作为检测线和质控线,确定抗体蛋白的最佳标记p H和最适蛋白浓度。采用抗体双夹心的方法对两株抗体蛋白进行组合,建立胶体金免疫层析方法。以优化的双夹心抗体组合,组装试纸条,进行了灵敏度的测定和血吸虫病人粪检阳性血清的敏感性评估,以并殖吸虫等其他寄生虫感染的血清测定了试纸条的特异性。结果:显示表达并获得了纯度较高的纳米抗体。胶体金标记VHH-48和VHH-52抗体的最适蛋白量为14μg/m L和10μg/m L,最适p H分别需要加入16μL和12μL体积的0.2 M K2CO3,并确定以VHH-52标金和VHH52划线为最佳的抗体双夹心组合。对可溶性虫卵抗原的最低检测量为3.4 ng/m L,检测血吸虫病人阳性血清的检出率为2.27%,检测其他寄生虫感染血清结果显示出良好的特异性。结论:成功构建了基于抗日本血吸虫虫卵抗原纳米抗体的胶体金免疫层析试纸条方法,为纳米抗体在血吸虫病快速诊断的应用奠定了一定基础。