抗供者特异性抗体(DSA)对内皮细胞损伤的机制研究
会议名称：《第十一届全国免疫学学术大会》
会议日期：2016年
学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学]
关 键 词：抗供者特异性抗体 MFI PI3K/AKT 内皮细胞 增殖
摘 要：目的:建立体外抗供者HLA特异性抗体(donor specific antibody,DSA)模型,分析不同平均免疫荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)的DSA对人脐静脉内皮细胞上PI3/AKT增殖通路的影响,阐明不同MFI的DSA引起内皮细胞增殖是内皮细胞受损的重要因素。方法:实验采取两株人脐静脉内皮细胞,通过Luminex方法检测不同浓度DSA的MFI值,设立阴性组、阳性组、中等阳性组、强阳性组、强强阳性组为实验组,以IgG为对照组。在建立体外细胞模型的基础上,采用Western Blot及CFSE等实验方法,研究不同MFI值的DSA对内皮细胞增殖的影响。结果:抗HLA-A2人源性抗体在浓度为0.00375ug/ml、0.015ug/ml、0.03ug/ml、0.06ug/ml、0.25ug/ml时MFI值处于阴性、阳性、中等阳性、强阳性、强强阳性;抗HLA-Cw1抗体在浓度为0.009 ug/ml、0.18ug/ml、0.375ug/ml、0.75ug/ml、1.5ug/ml时MFI值处于阴性、阳性、中等阳性、强阳性、强强阳性。以IgG为对照组,不同MFI值的抗HLA-A2抗体与HUVEC-1共培养15min后,PI3K/AKT信号通路中蛋白S6RP磷酸化的表达分别为78.2%、83.6%、90.6%、93.0%、100%、94.3%。抗HLA-Cw1抗体与HUVEC共培养后S6RP磷酸化的表达分别为67.4%、75.9%、89.3%、89.7%、93.6%、100%。不同MFI值的抗HLA-A2抗体和抗HLA-Cw1抗体与CFSE染色内皮细胞共培养48小时后,流式细胞仪检测细胞内荧光强度变化,在DSA阴性组、阳性组、中等阳性组、强阳性组、强强阳性组中,细胞增殖率分别为38.9%、58.4%、29.6%、60.1%、66.9%和20%、10%、15%、35%、90%。结论:本研究证实了不同MFI强度的抗HLA-A2、HLA-Cw1抗体,均可引起PI3K/AKT信号通路上蛋白S6RP磷酸化表达增强,随着MFI强度的增加,其磷酸化水平逐渐增加并引起细胞增殖,但不同DSA类型的特异性抗体引起内皮细胞损伤的强度不同,因此,为临床采用不同的干预治疗模式奠定了实验基础。