凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）几丁质酶家族三个新基因的克隆与组织表达分析
作者单位：厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室
会议名称：《华东六省一市生物化学与分子生物学会2009年学术交流会》
会议日期：2009年
学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 0905[农学-畜牧学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 090501[农学-动物遗传育种与繁殖]
摘 要：几丁质酶是一个多基因家族,广泛存在于各个生物中。果蝇几丁质酶家族包括16个成员,而人类几丁质酶家族有6个成员。几丁质酶主要的功能是降解几丁质,但还参与免疫反应等过程。在甲壳动物中,几丁质酶起着至关重要的生理作用,能帮助甲壳动物完成周期性蜕壳生长,另外还发现其参与对虾抗病毒。但迄今还没有关于甲壳纲几丁质酶家族多基因的报道。本文利用模式生物果蝇（Drosophila melanogaster）中已发现的几丁质酶家族各基因的蛋白编码序列去tblastnNCBI中的凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）的EST文库。获得若干条EST序列,经过DNAMAN软件拼接,获得两个潜在的对虾几丁质酶新家族成员序列。根据拼接的序列分别设计引物,从凡纳滨对虾肝胰腺中提取总RNA,反转成cDNA,PCR获得产物,结合3-RACE实验,分别得到两条长为1127 bp和1150 bp的部分编码序列,根据已有的研究结果,将其命名为CHT2和CHT6。将该序列提交至NCBIgenebank上,其登录号分别为FJ888479和GQ916594。分析发现CHT2编码分374个氨基酸。Scanprosite分析发现该蛋白含几丁质酶18家族催化保守区（catalytic domain）,其中谷氨酸残基（Glu）为活性中心残基。CHT6编码365个氨基酸,也含有谷氨酸活性中心的几丁质酶18家族催化保守区。进一步采用实时PCR技术研究基因在蜕壳间期的对虾不同组织的表达差异,发现CHT2主要在眼柄中表达,相对表达量是β-actin基因的1/3,在腮,壳膜和淋巴细胞中也有微量表达。CHT6在蜕壳间期虾各组织中的表达量都很低,进一步可检测其在蜕壳前期和蜕壳后期的表达变化,以研究其生理功能。