温州蜜柑果实促炎成分分离与鉴定
作者单位：华中农业大学园艺林学学院园艺生物学教育部重点实验室
会议名称：《中国园艺学会2014年学术年会》
会议日期：2014年
学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学]
基 金：国家‘973’项目(2011CB100601) 国家现代农业产业技术体系项目(CARS-27)
摘 要：柑橘除了色、香、味和果肉质地等传统意义的品质之外,还富含对身体健康产生显著影响而被称之为功能性的物质,如β-隐黄素内脂、川陈皮素、柚皮苷、橙皮油内酯、柠檬苦素等物质,对骨质疏松、风湿和若干癌症等均有预防功效。但消费者在享受柑橘的这些功效的同时,也时常会呈现喉咙干疼、口腔溃疡等俗称上火的炎症症状。为明确柑橘中含有的某种可致上火的物质,本研究中采用色谱分离技术结合蛋白质组学,筛选引起上火的物质成分,为改良品种和种质资源创新研究奠定基础。以温州蜜柑果实为材料,通过对引起上火物质的化学分离、小鼠巨噬细胞RAW 264.7炎症模型建立和对引起上火物质的蛋白鉴定等,对引起上火的成分进行鉴定。将温州蜜柑的果实进行去皮榨汁后分为水溶性和脂溶性部分。利用小鼠巨噬细胞系RAW 264.7炎症模型,评价温州蜜柑果实不同提取物的促炎效果。通过10 mg·mL的脂溶性和水溶性粗提物质处理小鼠的巨噬细胞系后,脂多糖、水溶性物质和脂溶性物质分别诱导产生的环氧合酶2(COX-2)分别是对照的46.11、42.77和1.11倍。相对脂溶性物质而言,水溶性组分可以诱发细胞发生更显著的炎症,同时半定量RT-PCR的检测结果也表明了水溶性提取物可以显著增加COX-2的转录表达。这些结果表明温州蜜柑水溶性提取物在炎症诱导发生中起了关键性的作用。利用截留量为8 kD的透析袋将水溶性物质分为大分子和小分子物质。再一次通过葡聚糖G-200凝胶色谱将大分子物质分为4个级分,收集第1个级分命名为F1,收集第2个级分命名为F2。结果发现小分子物质没有促炎效果,而大分子提取物能够诱导炎症因子前列腺素E2(PGE2)和环氧合酶2(COX-2)的过量表达,具有显著的促炎功效,效果与脂多糖(LPS)相当,进一步研究发现F1级分是引起上火炎症的关键原因之一。大分子F1提取物经SDS-PAGE检测后,用Nano LC-MS/MS进行蛋白质质谱鉴定。共检测得到6种可能候选蛋白质,分别是多聚半乳糖醛酸酶抑制剂(Polygalacturonase Inhibitor,PGIP)、胱抑素样蛋白(Cycstaincystatin-like protein)、丙酮酸脱羧酶(Pyruvate decarboxylase)、半胱氨酸蛋白酶(Cysteine protease)、磷脂酶Dα(Phospholipase D alpha)和几丁质酶(Chitinase)。进一步的蛋白质分离纯化工作仍在进行中。