重组人Hexastatin融合蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达及其纯化
作者单位：中国医学科学院北京协和医学院放射医学研究所天津市分子核医学重点实验室
会议名称：《中国核学会2011年学术年会》
会议日期：2012年
学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学]
关 键 词：Hexastatin 原核表达 纯化
摘 要：目的:构建人Hexastatin蛋白原核表达载体,大量表达并纯化Hexastatin蛋白,为其在体内外的活性研究奠定基础。方法:提取人食管癌EC9706细胞总RNA,通过RT-PCR方法扩增人Hexastatin基因,导入pMD18-T载体测序,然后克隆至pMAL-c4x表达载体,IPTG诱导表达,并利用Amylose亲和树脂纯化融合蛋白,产物进行Westernblot鉴定。结果:经PCR扩增成功获得了687bp的人Hexastatin基因,测序正确。重组人Hexastatin基因在BL21菌体中获得高效可溶性表达,表达的可溶性蛋白占总蛋白量的24.8%,纯化后的MBP-Hexastatin融合蛋白纯度可达90%,Westernblot证实表达蛋白为目的蛋白。结论:人Hexastatin基因克隆、表达及纯化的成功,为进一步开发其作为放射受体显像剂的研究奠定基础,同时也为肿瘤的生物治疗提供了新的方法。