中华大蟾蜍BDNF基因的克隆与原核表达载体的构建
作者单位：河南农业大学牧医工程学院
会议名称：《中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第五次会员代表大会暨第十六次学术研讨会》
会议日期：2010年
关 键 词：中华大蟾蜍 BDNF 编码序列 原核表达 载体构建
摘 要：哺乳动物中枢神经系统(CNS)神经元受损后的再生和功能的可塑性处于抑制状态,而低等脊椎动物鱼类和两栖类的CNS神经元均具有再生能力和可塑性,研究发现这种差异不是神经元自身的再生能力造成的,而是其所处的再生的分子微环境不同导致的。脑源性神经营养因子(brain derived neurophic factor,BDNF)便是其中的一种分子,BDNF为神经生长因子(neurotrophic factors,NTFs)家族成员,具有维持神经元的存活、促进神经元的发育、增殖分化等作用。本实验通过RT-PCR技术获得了中华大蟾蜍BDNF编码序列,序列5’和3’端分别引入限制性内切酶EcoRⅠ和NotⅠ识别位点,并将其定向克隆入pMD18-T载体,测序正确后亚克隆入原核表达载体pET-32a。结果表明,经过PCR、测序和酶切鉴定,所克隆的BDNF基因编码序列正确,并且克隆的BDNF基因编码序列已经正确插入到pET-32a中,成功地构建了原核表达载体pET-32a-BDNF,为进一步研究该两栖动物BDNF基因,及其重组蛋白的体外表达和抗体制备奠定了基础。