胸膜肺炎放线杆菌4型菌毛亚单位基因apfA特异性片段的克隆和表达

作     者：郭洋 刘思国 王春来 张秀华 彭永刚 宫强 杜绍范 

作者单位：沈阳农业大学畜牧兽医学院 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 

会议名称：《中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会》

会议日期：2005年

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：黑龙江省博士后启动基金资助 

关 键 词：猪胸膜肺炎放线杆菌 菌毛 apfA 克隆 表达 

摘      要：以猪胸膜肺炎放线杆菌血清型7型国内分离株25-4株基因组DNA为模板,PCR方法扩增apfA特异性基因片段,PCR产物经纯化后与载体PMD18-T进行连接、转化,经过酶切及序列分析鉴定后,亚克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,构建重组表达质粒pGEX-apfA,转化到大肠杆菌感受态DE3中,以IPTG进行诱导,进行SDS-PAGE电泳。结果表明,25-4株apfA基因与基因库中标准7型apfA基因同源性达到98%,所表达的融合蛋白相对分子量约为42KDa,与预测相符。apfA特异性基因片段的成功克隆和表达为猪胸膜肺炎放线杆菌病的致病机理的研究及新型疫苗的研制工作打下了基础。