流感嗜血杆菌的药物敏感性研究与全基因组分析

作     者：张洪斌 

作者单位：河北大学 

学位级别：硕士

导师姓名：李琦;陈首英

授予年度：2024年

学科分类：1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 10[医学] 

主      题：流感嗜血杆菌 耐药性 血清型 全基因组测序 流行特征 

摘      要：目的探究河北省儿童感染流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae,Hi)临床分离株对抗菌药物的敏感性和血清型;分析比较耐药性及血清表型和基因型的差异,探究河北省儿童感染Hi的耐药机制;探究基因型预测表型的方法;描述河北省儿童感染Hi的流行病学特征,为临床合理用药与感染控制提供依据。 方法收集2019-2022年河北省儿童医院病例相关标本进行分离培养,经微生物质谱确定为Hi;对其进行抗菌药物敏感性实验和血清分型;通过全基因组测序分析得到Hi的基因组信息,探究241株Hi的亲缘关系,描述河北省儿童感染Hi分子流行特征。 结果 ***感染病例临床特征:共分离到241株非重复Hi菌株,其中13株为侵袭性Hi,228株为非侵袭性Hi。145株来自男性,96株来自女性,男女比例为1.51:1。标本来源中呼吸道标本分离菌株最多,侵袭性Hi主要来自血液。 感染儿童中位年龄为3(1,5)岁,侵袭性Hi主要来自0.05)。 2.表型药敏实验结果:241株Hi均对左氧氟沙星(LVX)和环丙沙星(CIP)敏感。对氨苄西林(AM)非敏感率最高,为79.25%;其次为甲氧苄氨嘧啶/磺胺甲恶唑(SXT),为72.61%;侵袭性Hi中对头孢呋辛(CXM)、头孢曲松(CRO)、头孢吡肟(FEP)、亚胺培南（IPM)、美罗培南(MEM)和CLR的非敏感菌株占比高于非侵袭性Hi菌株(P0.05)。 3.241株Hi中β-内酰胺酶阳性菌株有138株;β-内酰胺酶阴性菌株103株,其中β-内酰胺酶阴性氨苄西林耐药菌株(BLNAR)为34株。β-内酰胺酶阳性菌株对AM、SAM、AMC、CEC的耐药率及头孢克肟(CFM)、CXM的非敏感率明显高于β-内酰胺酶阴性菌株(P0.05)。侵袭性Hi β-内酰胺酶阳性率低于非侵袭性Hi(P=0.047)。 4.多重耐药结果:多重耐药菌株有158株,构成比为65.56%;多重耐药模式有86种。 5.血清分型结果:SATA、qPCR和WGS三种方法结果一致,均检出Hib 10株,Hie2株,Hif7株,NTHi 222株。 ***结果:234株得到了对应的ST型,共88种,其中ST107最多;206株得到了对应的克隆群,共39种。共发现28个新的ST型。 7.耐药基因携带情况:241株Hi共携带19种耐药基因,每株携带1-8个耐药基因,其中携带率最高的是hunrm基因,其次是TEM-1基因,携带LpsA和mel基因较多。 8.毒力基因携带情况:241株分离株共检测出毒力因子4类14种,毒力基因102种,每株携带28-71个毒力基因。其中携带率最高的是gmhA/lpcA、lsgA、lsgC、lsgD、orfM和nsbB基因。 ***3突变的鉴定:35株没有产生氨基酸置换,206株有氨基酸置换。共发现18个氨基酸位点发生了置换,其中2个位点有2种氨基酸置换模式。 ***结果:241株Hi可以分成3个大分区(regionl、2、3)和其他小分区,产β-内酰胺酶菌株主要集中于region1、2,Hie和Hif亲缘关系较近。 结论 ***、qPCR及WGS三种方法所得到的血清分型结果一致,可以根据实际情况选择合适的方法进行Hi血清分型;NTHi菌株已成为河北省儿童感染Hi的优势血清型,Hib仍然是侵袭性Hi感染的主要原因。 ***已不能作为Hi感染的首选用药,FEP、CRO、LVX、SPX、IPM和MEM可以作为有效的治疗药物;Hi感染治疗应根据药敏结果合理选择抗菌药物,同时提高对Hi多重耐药的重视。 3.河北省儿童感染Hi耐药机制以产生TEM-1型β-内酰胺酶为主,BLNAR分离株的检出率较高;PBP3突变产生的氨基酸置换模式较多,ftsl基因的不同位点的突变对β-内酰胺酶类抗菌药物的影响不同。 4.河北省儿童感染Hib主要流行ST型为ST-95型,Hif为ST-598型,Hie流行克隆群为CC18克隆群;而NTHi的ST型显示出多样性的特点,其中最多的为ST-107型,不存在较优势的流行株。 5.河北省儿童感染Hi菌株携带耐药基因及毒力基因种类及数量较多,应继续加强耐药基因及毒力基因的监测力度。 6.通过四环素类、β-内酰胺类、大环内酯类、苯丙醇类等耐药基因检测能够较好的预测出Hi菌株对TE、AM、CEC、SAM、CLR、AZM和C等药物的耐药性。