染料木黄酮在小鼠蛛网膜下腔出血后通过调节SIRT1/P53信号通路缓解早期脑损伤的实验研究

作     者：朱泽超 

作者单位：中国医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：梁国标

授予年度：2023年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100204[医学-神经病学] 10[医学] 

主      题：蛛网膜下腔出血 染料木黄酮 早期脑损伤 SIRT1/p53信号通路 成年小鼠 

摘      要：目的:大量的实验研究表明蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,简称SAH)是在神经外科研究领域中,一种高致死率,高致残率的出血性脑卒中。SAH患者致残致死的主要原因之一是早期脑损伤(Early Brain Injury,简称EBI)。本实验在小鼠蛛网膜下腔出血模型的基础上,研究染料木黄酮(Genistein)对SAH后的EBI的影响和作用机理。方法:选取雄性C57BL/6J作为实验对象,将小鼠随机分为:假手术组(Sham组),出血模型组(SAH组),溶剂对照组(SAH+Vehicle组),低剂量药物组5mg/kg,中剂量药物组15mg/kg,高剂量药物组30mg/kg 6个分组。小鼠SAH的模型是通过血管内穿刺的方法建立起来的,其中假手术组的手术方法与上述方法一致,区别在于并未穿破血管。在建立蛛网膜下腔出血模型30min后,腹腔注射药物,染料木黄酮5mg/kg、染料木黄酮15mg/kg、染料木黄酮30mg/kg低、中、高三种不同的剂量。在SAH后24h、72h后分别进行SAH分级、神经评分、脑水含量的评估后,确定最佳注射剂量。之后,将雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组(sham)、模型组(SAH)、模型+染料木黄酮组(SAH+Genistein)三组。血脑屏障通透性是通过24h后伊文思蓝的渗出量来进行检测。并利用Western blot对SIRT1/P53信号通路、细胞凋亡相关蛋白、血脑屏障相关蛋白的表达进行检查;Tunel染色可观察细胞的凋亡情况。结果:在SAH后诱导后24、72h,与假手术组相比,出血组和溶剂组出血量增多,SAH评分增加。而染料木黄酮低中高给药后,发现染料木黄酮中剂量能够显著减少出血量降低SAH评分。Garcia评分和平衡木评分显示,中剂量组和高剂量组染料木黄酮都可以提高神经功能评分,其中中剂量组更为明显。与假手术组相比,脑含水量显著增加,而染料木黄酮中剂量和高剂量给药能够降低脑水肿,其中中剂量最为显著。通过western blot和Tunnel染色实验表明,染料木黄酮可抑制凋亡蛋白的表达,促进抗凋亡蛋白的表达,从而减少细胞凋亡的发生。染料木黄酮治疗能提高小鼠SAH后紧密连接蛋白的表达水平,降低血脑屏障在SAH后的通透性,缓解脑水肿。染料木黄酮可增加SAH后24h SIRT1的表达,降低p53、AC p53表达。结论:染料木黄酮可以通过调节SIRT1/p53信号通路,减轻脑水肿和神经元细胞凋亡的作用,改善小鼠SAH后的EBI,对SAH具有显著的治疗意义。