CD55在结肠癌组织中的表达及其转录调控机制研究

作     者：刘佳伟 

作者单位：华北理工大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张志

授予年度：2023年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：补体 CD55 结肠癌 TFCP2 miR-27a-3p 

摘      要：目的CD55在结肠癌的发生发展中起重要作用。本研究旨在研究CD55在结肠癌中的表达,并深入探讨其转录调控机制。方法采用TIMER2.0、UALCAN和HPA数据库分析CD55在结肠癌和癌旁组织中的表达情况。TRANSFAC和Contra v3用于分析CD55启动子区潜在结合的转录因子。Target Scan和Starbase v2.0数据库用于分析CD55 3’非翻译区(3’UTR)可能结合的miRNA。使用Survival Meth数据库分析CD55启动子区的甲基化修饰。Western Blot检测TFCP2和CD55的蛋白表达。采用双荧光素酶报告基因实验和ChIP实验检测TFCP2、NF-κB以及miR-27a-3p与CD55的靶向调控关系。使用PPI构建CD55相关蛋白互作网路,通过GO和KEGG对其进行通路富集分析。结果CD55在结肠癌组织中高表达。si-TFCP2可降低TFCP2的mRNA和蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验显示,敲降TFCP2或抑制NF-κB后,CD55启动子活性分别降低21%和70%(P0.05);活化NF-κB后,CD55启动子活性提高130%。突变CD55启动子区TFCP2或NF-κB结合位点后,CD55的转录活性分别降低66%和39%(P0.05)。ChIP实验显示TFCP2、NF-κB结合于CD55启动子区。miR-27a-3p与CD55 3’UTR区结合,CD55蛋白表达可被miR-27a-3p显著抑制。双荧光素酶报告基因实验结果显示,将构建好的CD55 3’UTR区野生型质粒与miR-27a-3p mimics共转染,CD55的荧光素酶活性下降56%(P0.001);而与miR-27a-3p antagomir共转染后CD55 3 UTR荧光素酶活性升高33%(P0.001)。突变CD55 3‘UTR的miR-27a-3p结合位点后,报告基因活性无显著变化。在结肠癌组织中,CD55的启动子区域存在高甲基化位点。通过PPI网络分析发现CD55相关的基因包括C4A、C4B、CFP、C3和C5AR1等。GO和KEGG通路富集分析结果显示,CD55及相关基因可能影响免疫相关通路。结论在结肠癌细胞中,CD55受TFCP2和NF-κB的正向转录调控,受miR-27a-3p的负向表达调控,并可能影响免疫相关通路。图16幅;表6个;参158篇。