新生儿Wiskott-Aldrich综合征4例临床特点及基因分析

作     者：张莹 

作者单位：天津医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：刘洋

授予年度：2021年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100202[医学-儿科学] 10[医学] 

主      题：新生儿 Wiskott-Aldrich综合征 WAS基因 WASp 宏基因组检测 临床特点 突变分析 

摘      要：目的:Wiskott-Aldrich综合征是一种罕见的X连锁隐性遗传的原发性免疫缺陷病,主要以皮肤湿疹、血小板减少,伴发免疫缺陷为其特征。在新生儿人群中,由于发病年龄较早,临床症状多不典型,极易发生误诊误治,严重影响患儿生存和预后。本研究旨在探讨新生儿Wiskott-Aldrich综合征患儿的具体临床特征以及基因突变位点相关特性,增强对该病病因学、临床表现、诊断、治疗等方面的认识,更好的指导临床诊治,降低患儿的病死率。方法:1.收集2013年12月至2020年12月于新生儿内科住院治疗的Wiskott-Aldrich综合征患者4例,对其住院期间详细的临床病史资料如性别、年龄、首发表现、家族史、体格检查、辅助检查、基因检测等进行分析、汇总。在获得家属知情同意后,采集患儿及其父母的外周血标本进行全外显子测序、Sanger测序一代验证。并对患儿后期病程发展进行了随访。2.对于1例病程中存在反复感染,基因检测结果显示存在大片段缺失的患儿,完善了病原微生物宏基因组测序。提取该家系3人和1名正常对照(女)人群的全基因组DNA,并进行DNA样本鉴定、DNA浓度检测。采用实时荧光定量PCR的方法对于该患儿基因突变显示的缺失片段区域进行相关验证。结果:1.本研究中4例患儿均为男性,起病日龄(12.45±10.6)天,符合X连锁隐性遗传的遗传模式。2例以发现皮肤出血点为首发症状,2例以发现血小板数量减低为首发症状。3例患儿在病程中存在反复的湿疹表现,1例患儿未见湿疹症状。4例患儿均合并有不同程度的感染、间断性的便血、贫血、体重不增或增长缓慢等症状。依据临床评分3例评定4分,1例评定3分。2.4例患儿动态监测血常规均存在血小板数量减低,血小板压积、分布宽度下降。其中3例合并有血小板体积减小,1例患儿血小板体积正常。4例患儿均存在抑制性T淋巴细胞数量减低,3例存在NK细胞比例增高,血清免疫球蛋白检测未见显著特征性改变。3例患儿行骨髓穿刺检查提示巨核细胞产板不良,1例未行骨髓穿刺检查。3.二代测序结果显示2例患儿存在无义突变,突变位点分别为c.100CT(p.R34X)和c.121CT(p.R41X),母亲均为杂合携带。1例患儿存在c.645-657del(p.P216Lfs*41)移码突变。1例患儿存在chr Xp11.23(48545160-48549563)区域4.4kb的片段缺失。4例患儿基因变异分类均显示致病性/可疑致病性突变。4.本研究4例患儿中仅1例于1岁9月龄行造血干细胞移植治疗,预后良好。2例患儿分别于2岁和4岁5月龄时死亡,1例患儿目前规律输注人丙种球蛋白姑息治疗中,等待后续根治性治疗。5.1例患儿病程中存在反复感染,抗感染治疗效果不佳,完善宏基因组微生物高通量测序检查,检测出解脂耶罗威亚酵母菌感染。给予针对性抗真菌治疗后,患儿症状好转。6.针对1例患儿基因大片段缺失进行了家系q-PCR验证,结果显示患儿基因8号至12号外显子区域为缺失片段,患儿母亲在该区域存在杂合缺失,患儿7号外显子基因拷贝数正常。结论:1.新生儿Wiskott-Aldrich综合征临床表现多不典型,部分患儿受机体致敏因素影响可无湿疹表现。患儿出血症状以消化道便血、皮肤出血点多见,常伴发不同程度的贫血及体重不增。2.新生儿Wiskott-Aldrich综合征患者细胞免疫以抑制性T淋巴细胞下降为主,受患者免疫缺陷程度不同、母体Ig水平等外界因素干扰,血清免疫球蛋白水平无显著规律性变化。血小板参数有助于Wiskott-Aldrich综合征的诊断,但是对于血小板体积正常的疑似患者也应提高警惕,避免误诊、漏诊。3.新生儿Wiskott-Aldrich综合征患者年龄小,免疫状态不健全,常易合并反复的重症感染。当常规抗感染治疗效果不佳时,需警惕特殊病原菌感染的可能。宏基因组微生物高通量测序检查可高效、准确的发现感染源,为临床诊治提供有力的帮助。4.全外显子测序技术可准确检测出点突变及CNV变异,在疾病的分子诊断中起着重要作用。本研究检测出4个WAS基因突变位点,其中2个新突变丰富了该病的基因突变谱。