田黄方及活性成分山奈酚对高血压心肾损伤的作用和机制研究

作     者：王琳 

作者单位：广东药科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：朱青

授予年度：2022年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：田黄方 山奈酚 心肾损伤 高血压 网络药理学 

摘      要：目的:本研究旨在评价田黄方及活性成分山奈酚对DOCA/salt诱导的高血压及其靶器官损伤的整体药效,并探讨其潜在分子作用机制,为田黄方防治高血压提供理论依据。方法:1.基于网络药理学研究田黄方防治高血压的作用基于网络药理学预测田黄方治疗高血压的作用靶点、有效物质基础和作用通路。通过TCMSP、UniProt和Swiss Target Predicition等数据库检测并筛选出田黄方的有效化合物成分及其作用靶点。从GeneCards、OMIM和DrugBank数据库提取高血压疾病的相关基因。基于Cytoscape软件进行疾病靶点间蛋白作用网络和田黄方活性成分靶点PPI网络构建,进而获得核心靶点。最后对核心靶点进行功能富集分析,以及对田黄方活性成分和靶点进行分子对接。2.田黄方对高血压心肾损伤的作用将35只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为5组:对照组(Ctrl组)、DOCA/salt高血压组(模型组)、DOCA/salt+田黄方低剂量组(100 mg/kg/d,THF-L)、DOCA/salt+田黄方高剂量组(200mg/kg/d,THF-H)和阳性药卡托普利组(captopril,30 mg/kg/d)。所有大鼠均摘除右侧肾脏。除对照组假手术外,其余各组大鼠在皮下植入醋酸脱氧皮质酮(DOCA,150 mg/rat),同时给予1%Na Cl(Ctrl组纯水),建立高血压大鼠模型,共4周。实验期间采用尾套法监测血压。检测心脏、肾脏纤维化、炎症因子和氧化应激因子等相关指标表达情况及血清中肌酐(Serum creatinine,Scr)和尿素氮(Blood Urea Nitrogen,BUN)的含量变化,观察心脏、肾脏病理损伤情况。3.山奈酚对高血压肾损伤的药效和机制研究实验设置3组:对照组(Ctrl组)、DOCA/salt高血压组(模型组)、山奈酚组(kaempferol,100 mg/kg/d)。造模过程同上述一致。观察肾脏病理损伤情况,检测肾脏纤维化、炎症因子和氧化应激因子等相关指标表达情况及血清中Scr和BUN的含量变化。结果:1.基于网络药理学研究田黄方防治高血压的作用本研究通过网络药理学筛选出田黄方治疗高血压的潜在活性成分berberine,quercetin,coptisine,ginsenoside f2,ginsenoside rh2,β-sitosterol和kaempferol等;潜在核心靶点TNF、AKT1、VCAM1、EGFR、PI3K、TGF-β1、IL17等;主要作用信号通路包括Pathways in cancer、PIP3-AKT、TGF-β1等。分子对接显示山奈酚对TGF-β1及相关靶点有更好的结合能力。2.田黄方对高血压心肾损伤的作用田黄方高、低剂量均能显著降低DOCA/salt诱导的血压升高,抑制BUN升高,改善肾功能,减轻心肾纤维化损伤,降低心肾组织促炎因子、趋化因子和氧化应激因子的表达。同时,田黄方下调TGF-β1和β-arrestin1蛋白和mRNA的表达。3.山奈酚对高血压肾损伤的药效和机制研究山奈酚能显著降低血压,抑制Scr和BUN升高,改善肾功能,减轻纤维化损伤、肾内炎症,可使氧化应激因子NOX3表达下调,NOX1和NOX2没有作用。同时,山奈酚抑制TGF-β1和β-arrestin1蛋白和mRNA的表达。结论:田黄方防治高血压具有多成分,多靶点协同作用的优势,能够抑制DOCA/salt诱导大鼠的血压升高,保护心肾损伤;山奈酚对DOCA/salt高血压及其肾损伤有保护作用。