鸡滑液囊支原体生物被膜形成能力与耐药相关性研究

作     者：康天灏 

作者单位：佛山科学技术学院 

学位级别：硕士

导师姓名：杨鸿;张楠

授予年度：2022年

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

主      题：鸡滑液囊支原体 耐药相关性 鉴定分型 生物被膜 最低生物被膜抑菌浓度 

摘      要：滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)感染会引发鸡、鸭、鹅、火鸡等家禽的传染性滑膜炎,临床症状主要表现为关节渗出性的滑液囊膜及腱鞘炎。MS在我国鸡群中广泛传播,近些年来呈现出严重的势态。由于抗菌药物的不合理使用,抗菌药物对MS的敏感性日益下降,对我国养鸡行业造成了严重的影响。微生物普遍以生物被膜(Biofilm,BF)形式生长,临床上85%的感染都和生物被膜相关,但目前未见针对MS生物被膜的研究。论文首先调查了广东部分地区MS的流行情况及耐药水平;其次对MS生物被膜的形态结构与形成能力进行研究,探究MS生物被膜的生物学特性;最后对MS生物被膜是否会对抗菌药物的敏感性产生影响这一问题展开研究,为后续深入探究耐药机制提供理论依据。试验对广东部分地区采集到的148个病鸡的样品进行MS的分离培养和鉴定分型,并测定恩诺沙星、多西环素、泰乐菌素、泰妙菌素对分离到的MS临床株的最低抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC);以MS标准株(WVU1853)为代表,对MS生物被膜的形态结构、形成能力等生物学特性进行研究;最后测定MS临床株形成生物被膜后的生物量,以及恩诺沙星、多西环素、泰乐菌素、泰妙菌素对上述MS临床株的最低生物被膜抑菌浓度(Minimum biofilm inhibitory concentration,MBIC),并使用统计学分析得到的结果,以此来验证MS在形成生物被膜之后是否会对抗菌药物的敏感性产生影响。结果如下:(1)148个病鸡样品中一共分离得到29株MS临床株,根据vlh A基因测序分型,26株MS临床株为K型,3株为A型。(2)药敏试验结果显示,临床分离株对试验所用4种抗菌药的敏感性均有明显下降,其中多西环素和泰妙菌素敏感性较好,恩诺沙星和泰乐菌素敏感性明显下降。(3)用结晶紫染色和刚果红染色对MS生物被膜的形态进行观察,发现其形态为块状或连片点状。扫描电子显微镜观察发现BF典型的塔状结构、蘑菇状结构和通道。(4)温度能影响MS生物被膜的生长,培养温度在33℃时MS生物被膜的生物量最多,其数量有6.35×10～7CFU/m L。(5)MS生物被膜形成后会使恩诺沙星、多西环素、泰乐菌素、泰妙菌素的敏感性降低,恩诺沙星的MBIC与MS生物被膜的生物量之间存在显著低负相关(r0,0.3≤|r|0.5,p0.05),多西环素、泰乐菌素、泰妙菌素的MBIC与BF生物量之间均无相关性。综上所述,我国广东部分地区流行的MS基因型主要为K型,且MS临床分离株对试验所用4种抗菌药的敏感性均有明显下降。MS生物被膜形态和结构与其他支原体相似,其形态为块状或连片点状,结构有典型的塔状结构、蘑菇状结构和通道。MS生物被膜形成后会使抗菌药物的敏感性降低。