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鸡滑液囊支原体LP78蛋白重组腺病毒载体的构建及雏鸡免疫原性评价

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中国兽医学报 2024年第4期44卷 677-684,705页

作者：赵超宋春单春兰胡茜王永璇韩帅博肖琨文明朱二鹏程振涛贵州大学动物科学学院贵州贵阳550025 贵州省动物疫病与兽医公共卫生重点实验室贵州贵阳550025 六盘水市动物疫病预防控制中心贵州六盘水553001

选取鸡滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)LP78蛋白,将LP78基因克隆至pMD19-T载体上后,采用腺病毒Ad-Max系统将pMD-LP78重组克隆质粒连接到穿梭载体pDC316-mCMV-EGFP上构建重组穿梭质粒pDCLP78,将pDC-LP78重组穿梭质粒与腺病毒大骨架pBHGlox(delta)E1、3cre共转染HEK 293A细胞包装成重组腺病毒pBH-LP78,RT-PCR及Western blot鉴定HEK 293A细胞系包装的重组腺病毒pBH-LP78。测定病毒滴度;再通过腿部肌肉免疫接种构建的重组腺病毒pBH-LP78,并用ELISA方法检测免疫鸡血清中的特异性抗体和细胞因子(IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-6)的分泌情况。PCR、双酶切鉴定和测序结果显示,成功构建了重组克隆质粒pMD-LP78和重组穿梭质粒pDC-LP78;RT-PCR及Western blot结果显示,目的基因在HEK 293A细胞中稳定表达;ELISA结果显示,血清中LP78特异性抗体和细胞因子(IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-6)的分泌量极显著升高(P鸡机体产生体液和细胞免疫应答。结果表明,成功构建了MS重组腺病毒载体疫苗pBHLP78,其可有效引起鸡机体产生体液和细胞免疫应答,为MS新型重组腺病毒载体疫苗的研发奠定了基础。

关键词：鸡滑液囊支原体 LP78蛋白重组腺病毒

鸡滑液囊支原体灭活疫苗的制备及其免疫保护效果研究

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家畜生态学报 2024年第1期45卷 78-81页

作者：姜肖军郭亚男何生虎宁夏大学农学院宁夏银川750021

为了研究鸡滑液囊支原体灭活疫苗在不同剂量下的免疫保护效果,该研究以40只20日龄健康海蓝褐雏鸡为研究对象,将鸡滑液囊支原体Q5-2菌株制成的灭活疫苗分3个剂量组对其进行免疫,共免疫3次。利用ELISA检测每组鸡的血清抗体效价,免疫结束... 详细信息

为了研究鸡滑液囊支原体灭活疫苗在不同剂量下的免疫保护效果,该研究以40只20日龄健康海蓝褐雏鸡为研究对象,将鸡滑液囊支原体Q5-2菌株制成的灭活疫苗分3个剂量组对其进行免疫,共免疫3次。利用ELISA检测每组鸡的血清抗体效价,免疫结束后将全部蛋鸡经滴鼻、滴眼途径进行攻毒,检验疫苗的保护效力。结果表明:(1)与对照组相比,3个剂量组2次加强免疫后抗体效价迅速升高,其中低剂量组抗体效价持续上升,达到峰值时的抗体效价也最高为1∶158000,3个剂量组之间差异显著(P支原体的概率明显低于对照组。表明制备的鸡滑液囊支原体灭活疫苗能刺激机体产生良好的免疫应答,对于强毒攻击具有较好的抵抗作用,并对强毒感染后动物的排毒起到一定抑制作用,从而为该病疫苗的开发及防控方面的研究提供参考依据。

关键词：鸡滑液囊支原体灭活疫苗免疫保护效果

鸡滑液囊支原体ZP-1株的分离鉴定及其致病性和免疫保护效果的评估

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中国预防兽医学报 2024年第5期46卷 455-460页

作者：李真亚孔嫄嫄杨红玉李允刘洁贾荣玲李生涛南阳农业职业学院河南南阳473000 河南省动物疫病防控工程技术研究中心河南南阳473000

为分离鉴定鸡滑液囊支原体(MS),并评估其致病性和免疫保护效果,本实验无菌采集南阳市多家鸡场35份疑似MS发病鸡的关节腔粘液和关节组织,通过病原分离培养后观察菌落、PCR鉴定并测序。结果显示,在改良Friis固体培养基上可见圆形、边缘整... 详细信息

为分离鉴定鸡滑液囊支原体(MS),并评估其致病性和免疫保护效果,本实验无菌采集南阳市多家鸡场35份疑似MS发病鸡的关节腔粘液和关节组织,通过病原分离培养后观察菌落、PCR鉴定并测序。结果显示,在改良Friis固体培养基上可见圆形、边缘整齐、隆起的“煎蛋样”菌落形态;PCR可以扩增到16S r RNA基因目的条带,扩增产物测序后与NCBI中登录的ATCC 25204标准菌株16S r RNA基因序列比对,结果显示二者的同源性达99%以上,本实验共分离到5株MS。选择ZP-1株进行生物学特性研究,通过颜色变化单位(CCU)试验测定其生长滴度、采用试剂盒测定其代谢产生的H_(2)O_(2)水平。结果显示,在培养24 h~36 h后,ZP-1株的生长滴度最高可达10^(12)CCU/mL,具有生长速度快、滴度高的特点。在甘油存在的情况下,ZP-1株产生H_(2)O_(2)的相对水平极显著高于弱毒疫苗株(P鸡,评估其致病性;利用该菌株制备灭活疫苗经皮下接种鸡后攻毒,分析ZP-1株的免疫保护效果。结果显示,该分离株可复制出MS典型症状及病变;利用该菌株制备的灭活疫苗对鸡的攻毒保护率可达80%,高于商品化疫苗,其降低MS关节组织定植水平和MS抗体水平与商品化疫苗一致。本研究获得了具有较高生长滴度(10^(12)CCU/mL)的MS分离株ZP-1,发现利用该MS分离株制备的灭活疫苗具有较好的免疫保护效果,为MS疫苗的研发奠定了基础。

关键词：鸡滑液囊支原体分离鉴定致病性免疫原性

2019-2022年我国部分地区鸡滑液囊支原体分离株基因分型及vlhA基因进化分析

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中国家禽 2024年第6期46卷 112-117页

作者：翟路峰吴营霞金云云赵旭冉田克恭张云静逄文强国家兽用药品工程技术研究中心河南洛阳471003 普莱柯生物工程股份有限公司河南洛阳471000

为了解我国鸡滑液囊支原体(MS)的最新感染情况,试验对2019-2022年在我国河南、河北、山东、安徽、江苏5个省份收集的152份疑似MS感染的鸡病料进行MS分离鉴定,对分离的MS菌株进行基因分型,并对其vlhA基因5′端保守区域(76~421 nt)进行遗... 详细信息

为了解我国鸡滑液囊支原体(MS)的最新感染情况,试验对2019-2022年在我国河南、河北、山东、安徽、江苏5个省份收集的152份疑似MS感染的鸡病料进行MS分离鉴定,对分离的MS菌株进行基因分型,并对其vlhA基因5′端保守区域(76~421 nt)进行遗传进化分析。结果显示:共分离到29株MS菌株,除其中1株为E型外,其余28株均为L型;29株MS均处在一个大的进化分支,与国内流行菌株亲缘关系较近,与国外流行菌株亲缘关系较远。研究提示:近四年我国流行的MS菌株相对独立,各地流行菌株同源性较高。

关键词：鸡滑液囊支原体基因型 vlhA基因 L型

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鸡滑液囊支原体病的诊断与控制措施

家禽科学 2024年第2期46卷 58-61,I0006,I0007页

作者：王宝晴杨青李炜孟绍原高宗旺辛集市田家庄动物卫生监督分所河北石家庄052360 辛集市旧城动物卫生监督分所河北石家庄052360 辛集市新垒头动物卫生监督分所河北石家庄052360

支原体介于病毒和细菌之间,没有细胞壁,所以临床上一些针对细胞壁的抗生素对支原体没有效果。支原体传播方式多样,既可以垂直传播,也可以水平传播,感染后几乎终生带菌,成为阳性带菌鸡,应激因素可促进该病的暴发和流行。鸡滑液囊支原体... 详细信息

支原体介于病毒和细菌之间,没有细胞壁,所以临床上一些针对细胞壁的抗生素对支原体没有效果。支原体传播方式多样,既可以垂直传播,也可以水平传播,感染后几乎终生带菌,成为阳性带菌鸡,应激因素可促进该病的暴发和流行。鸡滑液囊支原体属于支原体的一种,主要通过呼吸道进入机体,通过血液循环、消化循环蔓延至其他器官,易引发呼吸道疾病、滑液囊炎.

关键词：呼吸道疾病水平传播垂直传播带菌鸡应激因素鸡滑液囊支原体血液循环细胞壁

三种血清学方法和qPCR方法在鸡滑液囊支原体检测中的综合应用研究

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中国家禽 2024年第4期46卷 113-119页

作者：郭婷婷赵佳马爽陈杨樊鹏程毕涛旭楚电峰郭梦娇吴艳涛张小荣扬州大学兽医学院江苏扬州225009 青岛易邦生物工程有限公司动物基因工程疫苗国家重点实验室山东青岛266114

为评价不同方法对鸡滑液囊支原体(MS)活疫苗免疫和非免疫状态鸡群的监测效果,研究分别采用HI、SPA与ELISA三种抗体检测方法和qPCR方法同步对某养殖场A、B和C三组鸡群进行MS感染和抗体水平监测,其中A鸡群23日龄免疫MS活疫苗(MS-H株),B、... 详细信息

为评价不同方法对鸡滑液囊支原体(MS)活疫苗免疫和非免疫状态鸡群的监测效果,研究分别采用HI、SPA与ELISA三种抗体检测方法和qPCR方法同步对某养殖场A、B和C三组鸡群进行MS感染和抗体水平监测,其中A鸡群23日龄免疫MS活疫苗(MS-H株),B、C鸡群不免疫MS疫苗。结果显示:三种血清学检测方法所测MS抗体阳性率趋势基本一致,HI抗体效价变化规律和ELISA抗体效价变化规律相似,但血清学方法相对于qPCR方法具有一定的滞后性,qPCR可以最早发现MS野毒感染,且在使用活疫苗免疫的情况下对疫苗和野毒进行鉴别检测。研究提示:在条件允许的情况下,qPCR可以作为MS首选的监测方法;当检测条件受限时,上述三种血清学方法同样也可以用于评估MS野毒感染状况,但对结果的判断受母源抗体水平、疫苗免疫状况、野毒感染时间等多重因素的影响,在结果判断时应进行综合分析。

关键词：鸡滑液囊支原体血凝抑制试验血清平板凝集试验酶联免疫吸附试验 qPCR

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鸡滑液囊支原体发病规律与防控策略探讨

养禽与禽病防治 2024年第2期 36-47页

作者：侯博福建省农业科学院畜牧兽医研究所福州350013

自2010年以来,我国鸡群中滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)的感染率不断增高,目前MS已广泛存在于我国不同的鸡群中,包括蛋鸡、种鸡、白羽肉鸡和地方品种鸡等,其血清阳性率已超过40%,严重危害我国养鸡业,并造成了严重的经济损失。... 详细信息

自2010年以来,我国鸡群中滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)的感染率不断增高,目前MS已广泛存在于我国不同的鸡群中,包括蛋鸡、种鸡、白羽肉鸡和地方品种鸡等,其血清阳性率已超过40%,严重危害我国养鸡业,并造成了严重的经济损失。本文将针对鸡滑液囊支原体发病规律与防控策略进行探讨。

关键词：发病规律血清阳性率鸡滑液囊支原体白羽肉鸡防控策略地方品种鸡感染率蛋鸡

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鸡滑液囊支原体PCR检测方法的建立

家禽科学 2024年第6期46卷 27-31页

作者：陈文平李冬立康翠翠张妹程春格陈小娇由鹏王全武蔡晓庆北京市华都峪口禽业有限责任公司北京101206 国家肉鸡产业技术体系平谷综合试验站北京平谷101206

目前鸡滑液囊支原体(MS)在养鸡生产中时有发生,是一种顽固性、条件性疾病。在多种致病因素的作用易发,给养鸡生产造成了经济损失;为了快速诊断MS,特别是致病性鸡滑液囊支原体,本研究针对MS的VlhA基因设计特异性引物,通过优化反应条件,... 详细信息

目前鸡滑液囊支原体(MS)在养鸡生产中时有发生,是一种顽固性、条件性疾病。在多种致病因素的作用易发,给养鸡生产造成了经济损失;为了快速诊断MS,特别是致病性鸡滑液囊支原体,本研究针对MS的VlhA基因设计特异性引物,通过优化反应条件,进行灵敏性试验、特异性试验和重复性试验,建立快速高效检测MS的PCR方法。试验结果表明:该检测技术具有较好的灵敏性、特异性强且CV<3%,具有很好的符合性。

关键词：鸡滑液囊支原体 PCR 检测

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鸡滑液囊支原体病及其诊断与防治的研究进展

现代畜牧兽医 2024年第3期 68-72页

作者：李琼陈峥刘伟成张博胡紫微金钢铸许春燕河南农业大学动物医学院河南郑州450046

滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)可引起鸡的急性或慢性呼吸道疾病、传染性滑膜炎、空气传染病和蛋壳顶端异常等疾病,对家禽业造成了巨大的经济损失。文章就鸡滑液囊支原体病的流行病学、致病特点、临床症状、诊断方法和防控措施... 详细信息

滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)可引起鸡的急性或慢性呼吸道疾病、传染性滑膜炎、空气传染病和蛋壳顶端异常等疾病,对家禽业造成了巨大的经济损失。文章就鸡滑液囊支原体病的流行病学、致病特点、临床症状、诊断方法和防控措施进行综述,对鸡滑液囊支原体病的诊断技术及疫苗的研发及应用前景进行展望,以期为该病的临床防控提供参考。

关键词：鸡滑液囊支原体传染性滑膜炎新型疫苗研发