亚麻醉浓度七氟烷对新生鼠缺血缺氧性脑病的神经保护作用

作     者：陈宝玲 

作者单位：广州医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：宋兴荣

授予年度：2023年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100217[医学-麻醉学] 10[医学] 

主      题：亚麻醉浓度 七氟烷 新生儿缺氧缺血性脑病 神经保护 运动能力 

摘      要：研究背景脑瘫(Cerebral palsy,CP)主要因发育中的胎儿或婴儿大脑受到非进行性损伤引起,以持续性运动和姿势发育异常、活动受限为主要表现的综合征,常伴有感觉、认知、交流、行为障碍和/或癫痫等临床症状,是造成儿童主要致残性疾病之一。有研究报道国际脑瘫发病约为2‰,而我国发病率在1～5‰,脑瘫以缺血缺氧性脑病(HIE)为主。临床主要治疗手段是对症治疗和康复训练,但这只能一定程度上缓解疾病进展,疗效有限且缓慢。七氟烷是临床最常用的吸入麻醉药之一,可控性好,无创吸入给药。近二十年来,全麻药尤其是七氟烷暴露对发育大脑的神经毒性研究表明,七氟烷的神经毒性与暴露浓度和暴露时间有关,当低于临床麻醉浓度或短时间暴露(小于3 hrs)无神经毒性作用。且逐渐有临床及临床前研究发现,亚麻醉浓度七氟烷具有一定的器官保护作用,尤其是对神经系统损伤后的保护作用。因此,本研究选用Vannucci法构建缺血缺氧性脑病模型,探讨亚麻醉浓度七氟烷对缺血缺氧性脑病幼鼠的神经保护作用,为缺血缺氧性脑病治疗提供新的思路和方向。目的探讨亚麻醉浓度七氟烷对缺血缺氧性脑病幼鼠的神经保护作用。实验方法***法缺血缺氧性脑病小鼠模型建立出生后(Postnatal day,P)7天的C57BL/6J小鼠用七氟烷4%浓度吸入诱导进入麻醉状态后,将七氟烷浓度维持在3%并对幼鼠进行右侧颈总动脉闭塞术。平均手术时间5 min。结束将小鼠放置于密闭箱中,并通入8%氧气,92%氮气,进行缺氧损伤,持续1 hr。在此过程中使用监护仪、氧检测仪检测箱内氧浓度、温度情况。温度维持在35-36℃。根据是否进行缺血缺氧损伤分为HIE组和CTRL组。CTRL组放置于37℃保温垫上,暴露于与正常氧浓度的空气中持续1 hr。造模当日定义为Day0。在Day2行TTC染色明确缺血梗死灶,在Day1-3行后肢悬挂、步态评分、翻正反射早期行为学检测,在Day2-5天行后肢足角、负地轴反射,Day26-28行旷场实验、转棒实验行为学测试。2.亚麻醉浓度七氟烷对缺血缺氧性脑病模型小鼠干预本研究主要分两种治疗方案。方案一(SEV-E):在缺血缺氧脑损伤后立即给吸入低于1.2%、2L/min七氟烷暴露1 hr,连续10天;方案二(SEV-P):在幼鼠进行缺血缺氧脑损伤24 hr后开始给予七氟烷暴露治疗1 hr,每天同一时间段治疗1次,连续10天。对照组(CTRL组)在37℃的保温毯上暴露于室内环境1 hr。3.行为、生物学检测亚麻醉浓度七氟烷治疗期间行负地轴反射测试、体重测量、早期行为学检测、TTC染色,在损伤1月后进行行为学测试、免疫组化检测。实验结果1.与CTRL组相比,HIE组脑梗死面积显著增大(n=4,P0.05)。***染色结果显示,HI损伤后前额皮层有萎缩,损伤侧脑变小。4.与CTRL组相比,在Day7 HIE组的体重增长率有下降,差异具有统计学意义(n=4,P0.05)。6.在Day1-5天内行早期行为学检测,CTRL组、HIE组、SEV-E组与SEV-P组,四组之间后肢悬挂、步态、翻正反射及后肢足角的差异无统计学意义(n=4,P0.05)。7.在旷场实验中(n=4),与HIE组相比,低浓度七氟烷治疗(SEV-E、SEV-P)组小鼠的自发活动明显增加,差异具有统计学意义(SEV-E:P0.05)。8.在转棒实验(n=6)中,与CTRL组相比,HIE组小鼠掉落延迟时间减小,差异