PARVA在鼻咽癌中的表达及其对鼻咽癌细胞生物学功能的影响

作     者：罗承长 

作者单位：广西医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：莫武宁

授予年度：2022年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：鼻咽癌 PARVA 增殖 迁移 

摘      要：目的:鼻咽癌是一种起始于鼻咽粘膜的上皮恶性肿瘤,好发于我国南方地区,尤其是广西和广东两省。鼻咽癌发病部位隐匿,恶性程度高,容易发生转移,绝大多数病患就诊时已届于疾病的中晚期,预后情况很差。越来越多的研究表明癌基因的激活是鼻咽癌发生发展的重要因素。近年来,研究发现PARVA基因在多种癌症中表达增高,且其表达增高与癌症的发生和转移相关。目前,尚未有PARVA在鼻咽癌中的报道。本文主要研究PARVA在鼻咽癌中的表达情况及其对鼻咽癌细胞生物学功能的影响。方法:1.利用实时荧光定量PCR(quantitative Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction,q RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot,WB)检测人正常鼻咽上皮细胞NP69与鼻咽癌细胞HK1、HONE1和5-8F中PARVA m RNA和蛋白质层面的表达水平。2.应用慢病毒载体介导的RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,沉默HK1和5-8F细胞中的PARVA表达,并设置相应的阴性对照组。应用荧光倒置显微镜观察慢病毒感染效果和计算感染效率,分别通过q RT-PCR和WB法检测各组细胞PARVA m RNA和蛋白质的表达情况,以确认沉默效果。3.采用CCK-8实验检测沉默PARVA对HK1和5-8F细胞增殖能力的影响。4.应用细胞划痕和Transwell迁移实验检测PARVA表达抑制对HK1和5-8F细胞迁移能力的影响。5.通过WB技术检测PARVA对鼻咽癌上皮-间质转化(epithelialmesenchymal transition,EMT)进程的影响。结果:1.与NP69相比,HK1和5-8F中PARVA的表达量相对较高,因此选择这两株鼻咽癌细胞进行后续的细胞功能实验。2.实验组和阴性空载组的慢病毒转染效率均大于80%;与阴性空载组相比,PARVA m RNA和蛋白质在实验组的表达量均显著降低(p0.001),表明成功构建了稳定沉默PARVA的鼻咽癌细胞株。***-8实验结果表明,沉默PARVA表达后,5-8F和HK1细胞的增殖能力显著降低(p0.05)。4.细胞划痕实验显示实验组的细胞划痕治愈率显著降低(p0.05)。Transwell迁移实验显示,实验组细胞的迁移能力显著降低(p0.05)。***检测结果显示沉默PARVA后5-8F及HK1细胞中的EMT相关蛋白的表达量发生改变,包括Ecadherin蛋白表达升高,N-cadherin及Vimentin蛋白表达降低。结论:1.与正常鼻咽上皮细胞相比,PARVA的表达水平在鼻咽癌细胞中明显增高。***可显著促进鼻咽癌细胞的增殖和迁移能力。***可能通过EMT机制促进鼻咽癌的进展。