miR-100-5p靶向FGFR3调控甲状腺乳头状癌细胞的增殖、迁移及侵袭

作     者：高圣钰 

作者单位：佳木斯大学 

学位级别：硕士

导师姓名：孟凡石;刘爽

授予年度：2023年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：甲状腺乳头状癌 miR-100-5p FGFR3 信号通路 PI3K/AKT MAPK 

摘      要：目的:探索miR-100-5p靶向下游靶基因FGFR3调控甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移及侵袭的分子机制。方法:1.利用R语言通过微阵列数据库筛选得到甲状腺乳头状癌中差异表达miR-100-5p。***-PCR检测甲状腺乳头状癌临床组织与细胞中miR-100-5p的表达趋势。探讨甲状腺乳头状癌临床组织与癌旁组织中miR-100-5p表达水平与甲状腺乳头状癌患者的年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期等临床资料的相关性。***-100-5p、mimics-NC、inhibitor-100-5p、inhibitor-NC分别转染至TPC-1细胞株。利用qRT-PCR验证转染是否成功。CCK-8、划痕愈合实验、平板克隆、Ed U、Transwell实验明确miR-100-5p对PTC细胞增殖、迁移及侵袭的影响。4.进一步筛选miR-100-5p下游靶基因,并验证其作用机制:1)通过数据库miRDB、mir DIP、DIANATOOLs预测miR-100-5p下游靶基因。生物信息学深度挖掘TCGA-THCA数据库,得到差异表达的THCADEmRNA。通过韦恩图将THCADEmRNA与预测下游靶基因结果通过韦恩图进行交集,四种数据库共同交集于FGFR3、NOX4和KBTBD8。2)生物信息学预测候选靶基因富集信号通路。利用TCGA数据库、在线数据库ENCORI和qRT-PCR验证候选下游靶基因的表达趋势,筛选出miR-100-5p下游靶基因FGFR3。3)双重荧光素酶确定miR-100-5p与FGFR3之间的调控关系。4)下调FGFR3验证其对PTC细胞增殖、迁移及侵袭的影响:将siFGFR3、siFGFR3-NC转染至TPC-1细胞株。通过qRT-PCR验证转染是否成功。CCK-8、划痕愈合实验、Ed U、平板克隆及Transwell实验明确下调FGFR3对PTC细胞增殖、迁移及侵袭的影响,免疫印迹实验检测PI3K/AKT和MAPK信号通路相关蛋白表达趋势。5.通过回复实验探讨过表达FGFR3对转染mimics-100-5p的TPC-1细胞增殖、迁移及侵袭的影响,以及PI3K/AKT和MAPK信号通路相关蛋白表达趋势。结果:1.生物信息学确定miR-100-5p在三种GEO甲状腺乳头状癌miRNA微阵列中差异表达下调。TCGA数据库和ENCORI数据库验证miR-100-5p在甲状腺乳头状癌组织中低表达,差异有统计学意义(P0.05)。***-PCR检测显示miR-100-5p在甲状腺乳头状癌临床组织(n=42)和细胞系(TPC-1和B-CPAP)中低表达。临床相关性分析显示miR-100-5p与PTC患者的肿瘤大小(P=0.028)、性别(P=0.038)、TNM分期(P=0.001)存在相关性。过表达miR-100-5p可以抑制TPC-1细胞的增殖、迁移及侵袭,抑制miR-100-5p可以逆转这一过程。3.生物信息学预测FGFR3是miR-100-5p下游靶基因。KEGG分析FGFR3下游富集信号通路为PI3K/AKT和MAPK。双重荧光素酶确定FGFR3与miR-100-5p存在直接调控关系。敲低FGFR3通过PI3K/AKT和MAPK信号通路抑制TPC-1细胞的增殖、迁移及侵袭的能力。4.回复实验验证过表达FGFR3可以部分恢复mimics-100-5p对TPC-1细胞的增殖、迁移及侵袭的抑制作用。结论:1.过表达miR-100-5p抑制甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移及侵袭。2.过表达miR-100-5p通过靶向FGFR3抑制PI3K/AKT和MAPK信号通路激活,抑制PTC细胞的增殖、迁移及侵袭。