络沙坦抑制肺鳞癌上皮间质转化增强顺铂治疗敏感性的研究

作     者：林泽楠 

作者单位：广州中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：周海榆

授予年度：2022年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：肺鳞状细胞癌 血管紧张素受体阻断剂 顺铂 上皮间质转化 

摘      要：目的: 既往研究已经发现血管紧张素Ⅱ 1型受体(Angiotensin Ⅱ type 1 Receptor,AGTR1)的过表达与很多实体瘤患者的不良预后有关,血管紧张素Ⅱ(Angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)/AGTR1轴的激活与肿瘤增殖、侵袭和转移、上皮间质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)、血管生成密切相关;对比原始的非耐药细胞,诱导建立的铂类化疗药物治疗耐受的非小细胞肺癌(Non-Small Cell Lung Cancer,NSCLC)细胞系的AGTR1表达明显升高;回顾性临床研究发现在一线含铂化疗的局部晚期NSCLC 患者中,使用了 AGTR1 阻断剂(Angiotensin Receptor Blocker,ARB)的患者生存期更长。而肺鳞癌(Lung Squamous Cell Carcinoma,LUSC)中AGTR1的拷贝数变异比例较肺腺癌和其他癌种更高。本研究旨在探索在肺鳞癌中AGTR1的高表达对预后的影响,Ang Ⅱ/AGTR1轴的激活与上皮间质转化的关系和潜在的通路调控机制,络沙坦对肺鳞癌细胞上皮间质转化的影响以及联合络沙坦治疗能否增强肺鳞癌细胞对顺铂治疗的敏感性。 方法: 分析了癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库肺鳞癌队列(501例)肿瘤组织中AGTR1和血管紧张素转换酶(Angiotensin Converting Enzyme,ACE)表达与患者总体生存的关系,AGTR1表达与EMT的相关性以及GSEA分析潜在富集通路。体外实验检测了多种肺鳞癌细胞系(SK-MES-1、H520、H1703,KLN205)的 EMT 相关标记物 E-cadherin(E-cad)、Vimentin(Vim)以及 AGTR1表达,并用络沙坦或络沙坦联合顺铂治疗,通过蛋白质印迹(Western Blot,WB)检测E-cad和Vim表达情况评估EMT,以及通过MTT评估药物的细胞毒性。 结果: 在TCGA的肺鳞癌患者中,AGTR1(P=0.0042)和ACE(P=0.00054)低表达的患者具有更好的总体生存(Overall Survival,OS)。当按肿瘤TNM分期分层分析时,Ⅱ期和Ⅲ期的肺鳞癌患者表现出低AGTR1表达与更好的预后相关(P=0.0043),在经过倾向性评分匹配法匹配生存相关的临床基线特征后的队列中也能得到相似结果(P=0.025)。在肺鳞癌中,AGTR1 的表达与 Vimentin(r=0.57,P0.0001)、ZEB1(r=0.43,P0.0001)和 ZEB2(r=0.59,P0.0001)的表达呈正相关。SK-MES-1、H520 和 H1703 表达丰富的 AGTR1。SK-MES-1 的 Vimentin表达随络沙坦治疗(0、0.1、0.2、0.5μM)以剂量依赖性方式降低。随着络沙坦治疗剂量的增加,H520的E-cad表达也逐渐升高,同时Vimentin表达逐渐降低。与单独使用顺铂治疗相比,络沙坦和顺铂联合治疗显著增强了顺铂对SK-MES-1(P=0.0006)、H520(P=0.0053)和 H1703(P=0.0234)的细胞毒作用。 结论: 在肺鳞状细胞癌中,AGTR1的高表达与更差的预后以及EMT相关。在肺鳞癌细胞中,络沙坦治疗似乎促进了间质向上皮的转化,并且与单药顺铂治疗相比,络沙坦联合治疗增强了顺铂的抗肿瘤作用。