人参皂苷Rg1调控Wnt1/β-Catenin通路减轻心肌纤维化的研究

作     者：高雅婷 

作者单位：南京中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：石开虎

授予年度：2024年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：人参皂苷Rg1 心血管疾病 心肌纤维化 Wnt1 β-Catenin 

摘      要：目的: 探索人参皂苷Rg1对心肌纤维化的减轻作用及其与Wnt1/β-Catenin通路的关系。 方法: 1.C57BL/6小鼠被随机分配到三个不同的组别:对照组(Control组)、模型组(Model组)以及人参皂苷Rg1干预组(Rg1组)。我们在对小鼠进行了造模和人参皂苷Rg1干预后,使用超声心动图检测了各组小鼠心功能,对比了各组小鼠的心肌组织在HE和Masson染色下的病理表现,以评估小鼠心肌组织纤维化程度的变化;免疫组织化学染色法(Immunohistochemistry,IHC)检测心肌组织 Wnt1、β-Catenin、α-SMA、COL1 的蛋白表达情况;qRT-PCR检测心肌组织Wnt1、β-Catenin、α-SMA、COL-1的mRNA表达水平;蛋白质印迹法(Western blot,WB)检测心肌组织中Wnt1、β-Catenin、α-SMA、COL-1蛋白的表达状况。 2.提取小鼠原代心肌成纤维细胞(cardiacfibroblasts,CFs)分为Control组、Model组(TGF-β1)、Rg1 组(TGF-β1+Rg1)。分组干预后,用 WB 检测心肌细胞中 Wnt1、β-Catenin、α-SMA、COL-1的蛋白表达状况。 结果: 1.动物实验结果 超声心动图和心功能指标显示:与Control组对比,Model组的小鼠心功能明显变差,左心室射血分数(Left Ventricu1ar Ejection Fractions,LVEF)、左心室短轴缩短率(Left Ventricular Fractional Shortening,LVFS)明显下降,左心室舒张末期内径(Left Ventricular Internal Diameter at end diastole,LVIDd)、左心室收缩末期内径(Left Ventricular Internal Dimensionatendsystole,LVIDs)和心脏重量指数(heart weightindex,HWI)都明显上升,经过统计分析,这些差异是有意义的(n=6,**P0.001);与Model组对比,Rg1组的小鼠心功能有所改善,LVEF和LVFS均有一定程度的恢复、而LVIDd、LVIDs和HWI也有所上升,经过统计分析,这些差异是有意义的(n=6,*P0.05)。 心肌组织HE和Masson的病理染色结果表明:与Control组对比,Model组中的HE、Masson病理染色显示心肌纤维化程度升高,经过统计分析,这些差异是有意义的(n=6,**P0.001);与Model组对比,Rg1组的小鼠心肌纤维化程度明显降低,经过统计分析,这些差异是有意义的(n=6,**P0.001)。 IHC 的结果表明:与 Control 组对比,Model 组中的 Wnt1、β-Catenin、α-SMA、Col-1的蛋白阳性表达明显升高,经过统计分析,这些差异是有意义的(n=6,**P0.001);与Model组对比,Rg1组的Wnt1、β-Catenin、α-SMA、Col-1的蛋白阳性表达明显降低,经过统计分析,这些差异是有意义的(n=6,**P0.001)。 WB 分析显示:与 Control 组对比,Model 组中的 Wnt1、β-Catenin、α-SMA、Col-1 的蛋白表达明显升高,经过统计分析,这些差异是有意义的(n=6,**P0.001)。与Model组对比,Rg1组Wnt1、β-Catenin、α-SMA、Col-1的蛋白表达明显降低,经过统计分析,这些差异是有意义的(n=6,*P0.05,**P0.001)。 qRT-PCR 结果表明:与 Control 组对比,Model 组中的 Wnt1、β-Catenin、α-SMA、Col-1的mRNA表达明显升高,经过统计分析,这些差异是有意义的(n=6,**PP0.001)。与Model组对比,Rg1组Wnt1、β-Catenin、α-SMA、Col-1的mRNA表达明显降低,经过统计分析,这些差异是有意义的(n=6,*P0.05,**P0.001)。 2.细胞实验结果 CCK8结果表明:与Control组对比,Model组CFs增殖能力上升,经过统计分析,这些差异是有意义的(n=3,*P0.05,**P0.001);与Model组对比,Rg1组中CFs增殖能力明显下降,经过统计分析,这些差异是有意义的(n=3,*P0.05,**P0.001)。 WB 结果表明:与 Control 组对比,Mode1 组中的 Wnt1、β-Catenin、α-SMA、Col-1 的蛋白表达明显升高,经过统计分析,这些差异是有意义的(n=