JNK信号通路失调诱导内质网应激使FLD恶变向CCA转化的分子机制研究

作     者：赵春龙 

作者单位：苏州大学 

学位级别：硕士

导师姓名：何宋兵

授予年度：2023年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：c-JunN-末端激酶 纤维囊性肝病 胆管细胞性癌 内质网应激 硫代乙酰胺 

摘      要：背景:胆管细胞性癌(Cholangiocarcinoma,CCA)是一种高度致命的以胆道分化异常为特征的恶性肿瘤,发病率呈逐年稳步增长趋势。流行病学显示,纤维囊性肝病(Fibrocystic liver disease,FLD)是 CCA 发生的危险因素。重要的是,JNK(c-Jun N-terminal kinases,c-Jun N 末端激酶)信号通路与内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ER-stress)参与FLD的进展,并在FLD恶变向CCA转化过程中发挥关键作用。因此,进一步探索JNK、ER-stress在FLD与CCA之间的关系,从而寻找有效的治疗方案,不仅可以阻止FLD的进展,还可以阻断罹患CCA的风险。目的:探索JNK信号通路失调诱导内质网应激促使FLD恶变向CCA转化的分子机制。方法:采用JNKΔHepa小鼠构建FLD模型,并使用TAA刺激FLD小鼠制备CCA动物模型进行体内实验,包括H&E、TUNEL、IHC/IF染色、Western blot等;观察小鼠FLD恶变转化为CCA的表型、JNK信号通路和ER-stress通路的分子表达,以及细胞命运的改变。同时,体外实验,使用TAA(Thioacetamide,硫代乙酰胺)刺激未分化HepaRG细胞,观察JNK抑制剂(DJNKI-1)作用后细胞的转分化表达;最后通过收集的人FLD、CCA临床标本进行初步验证。结果:比较JNKf/f小鼠,32周时期JNKΔHepa小鼠Bip/GRP78-XBP1-Chop通路过表达。自8周起,TAA刺激24周,H&E显示JNKf/f小鼠肝脏呈现HCC瘤样改变,而JNKΔHepa小鼠肝脏呈现CCA瘤样改变;比较JNKf/f小鼠,JNKΔHepa小鼠肝脏的天狼猩红染色、αSMA染色阳性率明显加剧;Western blot显示坏死性凋亡关联蛋白(RIP 1、RIP3、MLKL)表达明显增加,而凋亡相关蛋白表达(Cleaved-Caspase 3,Cleaved-Caspase 8)增加不显著。TAA刺激未分化HepaRG细胞,TUNEL细胞阳性率随浓度增加而增加;给予JNK抑制剂DJNKI-1作用,胆管细胞标记物SOX9、CK19表达增加而肝细胞标记物HNF4α表达降低。人体FLD、CCA标本试验提示,细胞增殖标记物Ki67、纤维化标记物αSMA在FLD与CCA表达均有增加,而CCA中增加更显著。结论:JNK信号通路失调,是导致小鼠肝脏FLD进程并恶变向CCA转化的关键;UPR反应和ER-stress激活,促进肝脏纤维化、胆管上皮细胞异常增殖和肝细胞坏死凋亡,是FLD恶变向CCA进展的重要原因。