L-茶氨酸与EGCG联合干预对卵清蛋白致敏小鼠肠道特异性免疫的调节作用及机制

作     者：宋宪颖 

作者单位：湖南农业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：龚志华

授予年度：2022年

学科分类：0832[工学-食品科学与工程（可授工学、农学学位）] 08[工学] 083201[工学-食品科学] 

主      题：L-茶氨酸 EGCG L-茶氨酸+EGCG 卵清蛋白致敏模型 FcεRⅠ信号途径 

摘      要：特异性免疫是机体对外界抗原产生的保护机制,卵清蛋白等食物抗原导致食物过敏后肠道特异性免疫失调与机体健康密切相关。L-茶氨酸和EGCG是绿茶中两种主要活性成分,均具有抗炎、抗氧化、调节免疫等多种生物活性,但鲜见两者联合调节机体免疫尤其是特异性免疫功能的相关研究。本研究通过建立卵清蛋白致敏模型小鼠,分别用L-茶氨酸(100mg·kg·d)、EGCG(100mg·kg·d)、L-茶氨酸+EGCG低、中、高剂量(50mg·kg·d;100mg·kg·d;150mg·kg·d;其中L-茶氨酸与EGCG质量比为1:4)干预6周龄SPF级BALB/c雌性小鼠41天。采用酶联免疫、流式细胞术、16S r DNA、Western blot等方法,从模型小鼠体重、过敏反应、肠道形态结构、血清特异性抗体与过敏介质、肠道细胞因子、肠道PP结淋巴细胞增殖、肠道菌群及肠道相关蛋白表达等方面,研究分析了L-茶氨酸与EGCG联合干预对卵清蛋白致敏小鼠肠道特异性免疫的调节作用及机制。主要研究结果及结论如下:（1）卵清蛋白致敏小鼠模型的建立。采用雌性BALB/c小鼠、OVA致敏剂量为50μg及激发次数为4次的方法,小鼠过敏评分和OVA-IgE指标值均能达到致敏标准要求,可成功建立卵清蛋白致敏小鼠模型。（2）对肠道特异性免疫的调节作用。与OVA组相比,L-茶氨酸、EGCG及L-茶氨酸+EGCG联合干预均能显著抑制血清IgE、OVA特异性抗体的产生,显著减少过敏介质HIS和m MCP-1的释放（P0.05）,缓解过敏症状的发生,且中、高剂量的L-茶氨酸与EGCG联合干预能显著抑制OVA激发引起的免疫器官指数上升（P0.05）;同时,L-茶氨酸、EGCG及L-茶氨酸+EGCG联合干预还能够抑制肠道中Th17细胞、DC细胞（MHC-ⅡCD11c）和MC细胞（FcεRⅠαc-KIT）的分化,降低Th2型细胞因子IL-4、IL-5、IL-13含量,促进Th1细胞分泌IFN-γ以及Treg细胞分泌IL-10、TGF-β1（P0.05）,进而维护Th1/Th2的平衡而抑制过度免疫的发生;此外,L-茶氨酸、EGCG及L-茶氨酸+EGCG联合还能抑制OVA致敏引起的肠道微生物多样性的下降,增加乳杆菌科和乳酸杆菌属的丰度,降低有害菌螺杆菌科与螺杆菌属的丰度（P0.05）。综合来看,中、高剂量的L-茶氨酸+EGCG联合干预调节肠道特异性免疫的效果优于EGCG或L-茶氨酸单独干预组。（3）对肠道特异性免疫调节作用的机制。与OVA组相比,L-茶氨酸、EGCG以及L-茶氨酸+EGCG联合干预均能显著下调与过敏相关的FcεRⅠ信号通路上游关键蛋白Lyn、Syk磷酸化表达,阻止Lyn和Syk启动PI3K/AKT信号途径,显著下调PI3K和AKT信号分子的磷酸化表达（P0.05）,抑制FcεRⅠ信号通路的激活,抑制肥大细胞MC的活化,增强免疫细胞Treg的功能,抑制Th2型免疫的发生,维护Th1/Th2平衡和肠道稳态,调节肠道特异性免疫功能,从而抑制过敏反应的发生。