Schlafen3对内皮祖细胞生物学功能的影响及其可能机制

作     者：辛晨 

作者单位：贵州医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：刘兴德;况春燕

授予年度：2023年

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100104[医学-病理学与病理生理学] 10[医学] 

主      题：Schlafen3 内皮祖细胞 增殖 迁移 周期蛋白D1 

摘      要：1目的研究斯拉芬3(Schlafen3,Slfn3)对内皮祖细胞(Endothelial progenitor cells,EPCs)迁移,增殖等生物学功能的影响及机制。2方法离体培养小鼠脾源EPCs,利用免疫荧光检测Slfn3在小鼠脾源EPCs的表达和定位。通过过表达及RNA干扰的方法过表达及沉默EPCs中的Slfn3基因,将细胞分为五个组:control、Ad-control、Ad-Slfn3、sh RNA-control、sh RNA-Slfn3。在转染48小时后,分别用CCK-8检测细胞增殖情况、transwell小室及流式细胞术检测Slfn3基因表达的改变对EPCs迁移及周期的影响。通过q RT-PCR对CDK2、p27kip1、PCNA、Rb、Cyclin D1的m RNA表达水平进行检测,进一步明确Slfn3调控EPCs生物学功能可能的作用机制。3结果1.成功分离培养小鼠脾源EPCs。用FITC-UEA-I和Dil-Ac-LDL进行鉴定,激光共聚焦结果提示,同时摄取Dil-Ac-LDL和FITC-UEA-I的细胞占细胞总数79.3%。流式细胞术结果提示细胞CD34阳性表达(33.55±0.35)%、CD133阳性表达(14.81±1.12)%、FLK-1阳性表达(16.48±1.48)%,故分离的小鼠脾源细胞被鉴定为内皮祖细胞。2成功构建小鼠Ad-Slfn3重组腺病毒载体及小鼠sh RNA-Slfn3重组腺病毒载体,并将其成功感染EPCs,其在EPCs中的中的转染效率分别为(90.64±2.08)%、(91.64±1.98)%。3.免疫荧光共定位结果提示,Slfn3在原代EPCs中表达,主要定位在EPCs的细胞质中,在细胞核中也有少量定位。4.CCK-8法、transwell小室结果提示,在EPCs中过表达Slfn3抑制EPCs的增殖及迁移(P0.05)。通过Western blot分析各组细胞cyclin D1的表达水平,结果显示Ad-Slfn3转染可显着降低cyclin D1蛋白水平的表达(P0.05),与之相反,与对照组相比,sh RNA-Slfn3转染显著增加了cyclin D1蛋白水平的表达(P0.05)。4结论沉默Slfn3的表达显著促进EPCs的增殖、迁移;反之,过表达Slfn3,则抑制EPCs的增殖、迁移,且EPCs被停滞在细胞周期的G1期,其机制可能与调控cyclin D1的表达有关。