参附汤对海水浸泡低体温症大鼠生存时间及死亡率影响的实验研究

作     者：汪雅静 

作者单位：中国人民解放军海军军医大学 

学位级别：硕士

导师姓名：顾伟

授予年度：2023年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：海水浸泡 低体温症 SD大鼠 参附汤 生存时间 血清酶学 炎症因子 

摘      要：背景低体温症是海上战争、贸易等落海人员死亡的常见原因。迄今为止,合理有效的复温方式是救治低体温症人员的重要措施。常见的复温措施分为被动复温或主动复温,可帮助落海人员恢复正常的机体状态。然而,海上救援困难,长时程海水浸泡造成的急重度低体温症,除生存率下降外,还伴随着严重的复温后并发症,严重危害人体健康。目前,即使是在大型医院中,每年收治的海水浸泡低体温症患者数量仍然较少,无法实施临床试验。因此,动物模型的建立是研究海水浸泡低体温症的关键一步。近年来,中医药的应用可能为低体温症的救治带来新的希望。海水浸泡低体温症的中医病因病机为寒邪太盛,内中脏腑,阳气衰竭,治疗宜回阳固脱。参附汤具有益气、回阳、固脱的功效,单次口服参附汤能否用于海水浸泡低体温症的救治尚不明确,值得探索。目的1.建立大鼠海水浸泡低体温症平台,观察低温海水浸泡对大鼠生命体征的影响。2.以红参:熟附片比例=1:1为基础制备参附汤,单次口服后即刻建模,探究参附汤对海水浸泡低体温症大鼠生存时间及死亡率的影响。方法第一部分:海水浸泡低体温症大鼠实验平台的建立1.海水浸泡低体温症大鼠的平台搭建:包括自制大鼠直立固定器、自制大鼠海水浸泡固定水槽、冷暖自动恒温控制器以及平台的整体构架。2.大鼠温度记录器的植入:设置DS1922L电子温度记录器的温度监测任务,并植入雄性、SPF级、SD大鼠体内,监测大鼠的核心温度。3.植入有温度记录器的大鼠饲养10天后,选取生长良好的大鼠为实验动物,随机分为海水浸泡组和正常对照组;建立大鼠海水浸泡低体温症平台,海水浸泡组大鼠在15℃人工海水中浸泡直至死亡,浸泡过程中观察大鼠的生理变化、记录大鼠的活动意识简易分级、监测大鼠的生存时间和死亡率;以24 h为观察时间,正常对照组大鼠在相同室温条件下和无人工海水浸泡的大鼠固定水槽中固定;实验结束后,取出两组大鼠的温度记录器,导出数据;标本取材,进行石蜡切片制作和HE染色以评价两组大鼠肝脏、脾脏等脏器的病理变化。第二部分:参附汤对海水浸泡低体温症大鼠生存时间及死亡率影响的实验研究1.海水浸泡低体温症大鼠的平台搭建。2.参附汤的配置:检索中国知网数据库(China National Knowledge Infrastructure Database,CNKI)、Pub Med等多个网站,整理近现代参附汤组成及临床应用情况;将红参和熟附片按照1:1的比例配置,用煎药锅合煎;配置不同浓度参附汤;采用超高效液相色谱-高分辨质谱联用方法(UPLC-Q-TOF/MS)对参附汤进行成分分析。3.不同剂量参附汤对海水浸泡低体温症大鼠的生存时间和死亡率的影响:将雄性、SPF级、SD大鼠随机分为海水浸泡对照组、0.675 g/kg参附汤组、1.35 g/kg参附汤组、2.7 g/kg参附汤组、5.4 g/kg参附汤组、10.8 g/kg参附汤组,每组10只。大鼠用不同剂量参附汤或蒸馏水单次灌胃后,置于15℃人工海水中即刻建立海水浸泡低体温症模型,在浸泡过程中记录大鼠活动意识简易分级,监测大鼠的生存时间和死亡率。4.参附汤对海水浸泡低体温症大鼠病理及血液学指标的影响:将雄性、SPF级、SD大鼠随机分为4组,分别为1.5 h对照组、1.5 h参附汤组、3 h对照组、3 h参附汤组,每组10只。大鼠用1.35g/kg参附汤或蒸馏水单次灌胃后,在15℃人工海水中建立海水浸泡低体温症模型;浸泡结束后,即刻采集大鼠血液和重要脏器标本;检测大鼠血常规、肝功能、肾功能、心功能、炎症因子的血液指标;石蜡切片制作和HE染色以评价两组大鼠肝脏、心脏、脾脏、肺脏、肾脏等脏器的病理变化。结果第一部分:建立海水浸泡低体温症大鼠的实验平台1.随着浸泡时间的延长,海水浸泡组大鼠的活动度下降,呼吸、心率减弱,逐渐进入晕厥状态。2.低温海水浸泡前,正常对照组与海水浸泡组大鼠核心温度无显著差异(P=0.475);正常对照组在固定过程中核心温度始终无明显变化,10 min后,海水浸泡组大鼠平均核心温度低于32℃(P0.001);20 min后,低于28℃(P0.001);40 min后,低于25℃(P0.001);70 min后,低于21℃(P0.001);170 min后,平均核心温度接近水温(P0.001)。3.正常对照组在固定过程中意识分级无明显变化,海水浸泡30 min时,两组无显著差异(P=0.317);海水浸泡1 h后,两组出现显著差异,海水浸泡组大鼠活动意识简易分级下降(P0.001)。4.正常对照组大鼠24 h内均存活,海水浸泡组大鼠3.77 h开始死亡,50%死亡时间为13.53 h,100%死亡时间为16.77 h。5.与正常大鼠脏器相比,经海水浸泡后,死亡大鼠的肝脏、心脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃和小肠均有显著病理变化。第二部分:参附汤对海