MyD88-NF-κBp65信号通路在脓毒症心肌损伤中作用机制及龙胆苦苷对其影响的实验研究

作     者：张志卫 

作者单位：内蒙古医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：周丽华

授予年度：2023年

学科分类：100218[医学-急诊医学] 1002[医学-临床医学] 1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 10[医学] 

主      题：脓毒症心肌病 心肌损伤 龙胆苦苷 CLP MyD88-NF-κBp65 

摘      要：目的:通过构建脓毒症心肌损伤动物模型,探讨MyD88-NF-κBp65信号通路在脓毒症心肌损伤中的作用机制及龙胆苦苷对其影响。方法:1.分组:将32只雄性Wistar大鼠随机分为分别为假手术组(n=8)、脓毒症组(n=8)、龙胆苦苷组(n=8)和MyD88抑制剂(TJ-M2010-5)组(n=8,以下简称抑制剂组)。2.分组处理:假手术组大鼠手术前3天予以腹腔注射等量生理盐水控制变量,手术时只开腹翻动肠管,盲肠不结扎穿孔,间断缝合关腹。脓毒症组大鼠造模前3天予以腹腔注射等量生理盐水控制变量,盲肠结扎穿孔法(CLP)构建大鼠脓毒症心肌损伤模型;龙胆苦苷组大鼠造模前3天予以腹腔注射龙胆苦苷(50mg/kg·d)预处理,然后行CLP法造模;抑制剂组大鼠造模前3天予以腹腔注射TJ-M2010-5(25mg/kg·d)预处理,行CLP法造模。3.观察及检测指标:观察每组大鼠一般状态及取材时腹腔局部变化;光镜下观察经苏木素-伊红(HE)染色的心肌组织变化,并对心肌组织病理变化评分;酶联免疫吸附分析(ELISA)检测肌钙蛋白(c Tn T)的含量及肿瘤坏死因子(TNF)-α和白介素(IL)-6水平;免疫组化(Immunocytochemistry,IHC)检测心肌组织中MyD88、NF-κBp65蛋白表达情况,并对上述蛋白表达进行半定量分析。结果:1.大鼠一般状态及取材时腹腔局部变化:⑴一般状态:假手术组大鼠呼吸平稳、活动量正常和大便成形;脓毒症组大鼠精神不振、呼吸急促、反应差、毛发竖起、相互聚集和几乎无进食饮水;龙胆苦苷组大鼠精神倦怠、呼吸略促、活动量少和进食饮水量减少;抑制剂组大鼠术呼吸略促、毛发竖起、活动量少、相互聚集和进食水饮量减少。⑵取材时腹腔局部变化:假手术组大鼠,打开腹腔未见明显出血感染征象;脓毒症组大鼠打开腹腔可见脓液及血样渗出液,有恶臭味,盲肠出现发黑坏死等感染征象,并有肠管粘连;龙胆苦苷组大鼠打开腹腔可见脓液及血样渗出液,盲肠出现坏死等感染征象;抑制剂组大鼠打开腹腔可见肠管扩张,有脓性及血性渗出液,盲肠出现坏死感染征象。2.心肌组织病理变化:⑴假手术组:心肌细胞排列整齐,无细胞核肿胀情况,未见明显炎性细胞浸润。⑵脓毒症组:心肌细胞排列紊乱,肌纤维间空隙增宽,部分断裂,细胞核汇集,可见炎性细胞浸润。⑶龙胆苦苷组:心肌纤维空隙增宽,排列尚齐,少量细胞核肿胀,可观察到炎性细胞浸润。⑷抑制剂组:心肌纤维空隙增宽,少量细胞核肿胀,可见血管扩张及少量炎性细胞浸润。心肌组织病理学评分:脓毒症组、龙胆苦苷组和抑制剂组的病理评分比假手术明显增大,有统计学差异(P0.05)。***检测血清c Tn T、TNF-α和IL-6水平:检测血清c Tn T、TNF-α和IL-6水平,脓毒症组、龙胆苦苷组和抑制剂组比假手术组有明显升高,有统计学差异(P0.05)。***检测心肌组织中MyD88和NF-κBp65水平:检测心肌组织中蛋白分子MyD88和NF-κBp65表达水平,脓毒症组、龙胆苦苷组和抑制剂组比假手术组明显升高,有统计学差异(P0.05);龙胆苦苷组和抑制剂组比脓毒症组降低,有统计学差异(P0.05);龙胆苦苷组与抑制剂组相比表达升高,有统计学差异(P0.05)。结论:1.本实验中大鼠经盲肠结扎穿孔法(CLP)成功构建了脓毒症心肌损伤模型;***88-NF-κBp65信号通路激活炎性因子的高表达所介导失控的炎症反应可能是脓毒症心肌损伤的机制之一;3.龙胆苦苷可能通过抑制MyD88-NF-κBp65信号通路的激活,减少炎性因子的释放,发挥其抗炎及保护心肌的作用。