银杏叶注射液原料药中萜苷类化学成分的研究

作     者：孙泽世 

作者单位：中国人民解放军海军军医大学 

学位级别：硕士

导师姓名：李慧梁

授予年度：2023年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：银杏叶注射液 降倍半萜苷 倍半萜苷 苯丁烯苷 细胞毒性 

摘      要：银杏(Ginkgo biloba L.)是裸子植物中银杏科银杏属唯一现存的植物,具有重要的药用价值。二十世纪六十年代研发出标准化的银杏叶提取物(GBE)并被命名为EGb 761,随后银杏叶提取物制剂规模不断扩大。银杏叶注射液作为其中一种制剂类型被广泛运用于临床治疗脑部和周围血流障碍,但根据其质量控制要求除了24.0%的总黄酮醇苷及6.0%萜类内酯外仍存在很大一部分未知成分,彻底阐明其物质基础及对应的生物活性对银杏叶注射液的研究与应用具有重大意义。本课题选择银杏叶注射液原料药作为研究对象,通过多种现代色谱分离纯化技术(包括正相硅胶柱,MCI中压色谱柱、Sephadex LH-20凝胶色谱柱、RP-C18色谱柱、制备型和半制备型HPLC等)分离纯化出大量的单体化合物,接下来通过运用多种现代波谱分析和鉴定手段(HR-ESI-MS、1D及2DNMR、X线单晶衍射技术、Mosher反应、计算ECD等)对这些分离出的单体化合物进行系统全面的结构解析。最后总共分离鉴定出41个单体化合物(包括1个人工合成产物)。对从银杏叶注射液原料药中分离的化合物进行分类,包括萜苷类化合物12个,木脂素类化合物10个,黄酮类化合物10个,其它类化合物9个。其中新化合物共8个,包括4个降倍半萜苷,1个倍半萜苷及其水解产物,2个苯丁烯苷类化合物。这4个降倍半萜苷均为紫罗兰醇(酮)型化合物,其中一个紫罗兰酮型倍半萜苷(YX-1)为新骨架化合物,具体结构为紫罗兰酮的支链形成了一个新的五元环。2个苯丁烯苷类化合物及倍半萜苷水解产物均具有单晶衍射结构,并以此确定了它们的绝对构型,剩余的降倍半萜苷及倍半萜苷的绝对构型通过查阅文献、Mosher反应、对比它们的计算ECD和实验ECD数据等方式进行了最终确定。为了检测所有新化合物潜在的生物活性,通过查阅文献发现降倍半萜苷类化合物对肿瘤细胞可能存在细胞毒作用,因此对所有分离得到新化合物进行了细胞毒性评价,实验细胞包括人肝癌细胞Hep-3B、人结肠癌细胞HCT-116、人乳腺癌细胞MCF-7,以及非癌化的人脐静脉内皮细胞(h UVEC),结果发现所有新化合物对所有实验细胞均无明显的细胞毒作用(IC100μM)。根据实验结果可知这部分新发现化合物对肿瘤细胞暂时没有发现明显生物活性同时对人体也暂无毒性作用。通过本课题的研究丰富了银杏叶注射液的物质基础,初步研究了新化合物的部分生物活性与毒性,对阐明银杏注射液的物质结构基础起到了积极作用。