芹菜素通过AMPK/mTOR通路对肺癌A549细胞自噬的影响

作     者：雷轩 

作者单位：西南医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王文军

授予年度：2023年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：芹菜素 A549细胞 自噬 AMPK/mTOR通路 

摘      要：目的:探讨芹菜素(Apigenin,APG)对肺癌A549细胞自噬的影响及其与腺苷单磷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(AMPK/m TOR)信号通路的关系。方法:体外培养人肺癌A549细胞作为实验对象。1.将肺癌A549细胞分为5组:空白对照组(0μmol/L APG)和20、40、80、160μmol/L APG实验组,采用CCK8法测定芹菜素处理以上5组24、48、72h后观察A549细胞增殖的变化,分别计算作用24、48、72h后的IC值,根据IC值,选择合适浓度及时间开展后续实验。2.根据实验1结果,通过MDC染色法测定0、20、40、80μmol/L APG影响肺癌A549细胞自噬的情况,并计算各组积分光密度值(IOD),采用Western blot法检测自噬相关蛋白LC3Ⅰ、LC3Ⅱ和P62表达情况。3.采用Western blot法测定0、20、40、80μmol/L APG对肺癌A549细胞AMPK/m TOR通路关键蛋白p-AMPKα、AMPKα、p-m TOR、m TOR表达水平的影响。4.使用AMPK抑制剂Compound C预处理A549细胞后再予以APG干预,MDC法测定细胞自噬情况,Western blot法测定自噬相关蛋白和AMPK/m TOR通路关键蛋白的变化情况。结果:1.相比于空白对照组,20、40、80、160μmol/L APG组均能抑制A549细胞增殖,并呈浓度依赖关系(P0.05),160μmol/L APG组在一定时间内呈现时效关系。其24、48和72h的IC值分别为128.13、52.18、24.03μmol/L,后续选择0、20、40、80μmol/L APG作为实验浓度,作用时间为48h。2.与空白对照组比较,各浓度APG组A549细胞中含高亮点状荧光的自噬小泡随APG浓度升高依次增多(P0.05),各组IOD值分别为85.65±7.29,489.63±7.43,2542.17±103.11,8457.53±153.27;Western blot结果显示,相比于空白对照组,随着APG浓度增加,细胞中LC3Ⅰ、LC3Ⅱ表达水平及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值依次升高,P62蛋白表达逐渐降低,均呈浓度依赖性(P0.05)。*** blot结果显示,相比于空白对照组,芹菜素组p-AMPKα蛋白表达水平和p-AMPKα/AMPKα比值随浓度升高逐渐增加,而p-m TOR蛋白表达水平和p-m TOR/m TOR比值随浓度升高逐渐降低,均呈浓度依赖性(P0.05)。4.加入AMPK抑制剂Compound C预处理后,与80μmol/L APG组比较,芹菜素+抑制剂组细胞中含高亮点状荧光的自噬小泡减少,IOD值降低,LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p-AMPKα蛋白的表达水平及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、p-AMPKα/AMPKα比值均明显下降,而P62、p-m TOR蛋白的表达水平及p-m TOR/m TOR比值均明显升高(P0.05)。结论:1.芹菜素能抑制肺癌A549细胞增殖,且随芹菜素浓度升高,抑制细胞增殖能力越强,呈浓度依赖性;2.芹菜素能促进肺癌A549细胞自噬并上调自噬相关蛋白表达,且呈浓度依赖性;3.芹菜素可呈浓度依赖性激活肺癌A549细胞的AMPK/m TOR通路;***抑制剂Compound C可逆转芹菜素对A549细胞AMPK/m TOR通路的激活作用,并抑制芹菜素诱导的细胞自噬;5.芹菜素抑制肺癌A549细胞增殖并诱导自噬,其作用机制可能与活化AMPK/mTOR通路有关。