基于TLR3/NF-κB信号通路探讨宣白承气加味对H1N1感染A549细胞机制的研究

作     者：齐心 

作者单位：辽宁中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王雪峰

授予年度：2023年

学科分类：100506[医学-中医内科学] 1005[医学-中医学] 10[医学] 

主      题：宣白承气汤加味 甲型流感病毒 TLR3 NF-κB 

摘      要：目的:构建H1N1感染A549流感病毒模型,检验宣白承气汤加味不同时间点对抗流感病毒的疗效,研究宣白承气汤加味对病毒模型TLR3/NF-κB通路及其相关因子TNF-α、IL-6的影响,阐明宣白承气汤加味治疗A549流感病毒模型的机制。材料与方法:首先进行A549细胞培养和鸡胚增毒,根据流感血凝实验筛选出合适的流感病毒毒株,并检测出H1N1半数组织感染量(TCID50)。通过细胞毒性实验和药物抗病毒指数实验计算出半数细胞毒性浓度(TC50)和半数药物有效浓度(IC50),继而计算出药物的流感病毒治疗指数(TI)。应用间接免疫荧光实验,检测A549流感病毒模型三个时间点24h、48h、72h及每个时间点对应的不同组别正常组、模型组、中药组、西药组中甲型流感病毒核蛋白(NP)的表达情况。采取蛋白免疫印迹法(Western blot)检测A549流感病毒模型各时间点24h、48h、72h中正常组、模型组、中药组、西药组TOLL样受体3(TLR3)、核因子k B(NF-k B)两个蛋白的变化。利用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测A549流感病毒模型不同时间点及不同组别对应的上清液中肿瘤坏死基因α(TNF-α)、白介素6(IL-6)两个因子的变化。结果:1.H1N1半数组织感染量(TCID50)为10。2.药物抗流感病毒治疗指数(TI):宣白承气汤加味TI=4.94,磷酸奥司他韦TI=6.19。3.间接免疫荧光实验结果:在24h、48h、72h三个时间点中,与正常组相比,模型组和药物组均有流感病毒核蛋白的表达;药物组与模型组相比,NP均减少。4.蛋白免疫印迹法(Western blot)实验结果:在24h、48h、72h三个时间点中,模型组与正常组相比,TLR3和NF-κB的表达均增多(P0.05);与模型组相比,药物组TLR3和NF-κB均减少(P0.05);中药组与西药组相比,有统计学差异(P0.05)。5.酶联免疫吸附测定法(ELISA)实验结果:在24h、48h、72h三个时间点中,与正常组相比,模型组与药物组A549上清液中TNF-α、IL-6的表达均增多(P0.05);与模型组相比,药物组TNF-α、IL-6均减少(P0.05);中药组与西药组相比有差异(P0.05)结论:1.成功构建H1N1感染A549流感病毒模型。2.宣白承气汤加味治疗流感病毒有效。3.宣白承气汤加味可能是通过抑制TLR3/NF-κB通路从而减少相关因子TNF-α、IL-6的释放来对抗流感病毒的。