HSV-1感染小胶质细胞后GM130通过调节TLR3参与神经免疫反应

作     者：刘佳 

作者单位：中南大学 

学位级别：硕士

导师姓名：卢伟

授予年度：2022年

学科分类：1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 100401[医学-流行病与卫生统计学] 10[医学] 

主      题：单纯疱疹病毒性脑炎 HSV-1 高尔基体 GM130 先天免疫反应 TLR3 

摘      要：目的:探讨HSV-1感染小胶质细胞后,GM130通过调节TLR3参与神经免疫反应的机制研究。方法:1.HSV-1感染BV2小胶质细胞建立HSV-1感染的体外模型,在HSV-1感染6h、12h、24h时通过免疫印迹(IB)检测GM130、TLR3的蛋白水平,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测炎症因子IFN-β、TNF-α、IL-6的分泌,免疫荧光染色(IF)和透射电镜(TEM)观察高尔基体的结构改变;2.在HSV-1感染模型中研究GM130对TLR3的影响。敲降GM130或过表达GM130后通过IB检测TLR3的表达水平,IF和TEM观察高尔基体形态,ELISA法检测上述炎症因子的分泌水平;3.在敲降GM130后添加TLR3激动剂(Poly(I:C))处理,在过表达GM130后添加TLR3抑制剂(TLR3i)处理,观察GM130对炎症因子的影响是否由TLR3介导。结果:1.与未感染组相比,HSV-1感染组中GM130和TLR3的蛋白水平降低,高尔基体碎裂,炎症因子IFN-β、TNF-α、IL-6的分泌在6h、12h升高,而在感染后24h开始降低;2.在未感染的BV2细胞中,敲降GM130后高尔基体碎裂,同时TLR3表达显著降低;HSV-1感染12h后敲降GM130加重了高尔基体的破坏,引起TLR3的表达进一步降低,同时病毒滴度也明显上升;3.在HSV-1感染的BV2细胞中,过表达GM130可以减轻HSV-1诱导的高尔基体碎裂,部分恢复TLR3的表达;4.在HSV-1感染的BV2细胞中,SiRNA敲降GM130后添加TLR3激动剂Poly(I:C)处理,部分恢复TLR3的表达和炎症因子的分泌;5.在HSV-1感染的BV2细胞中,过表达GM130后添加TLR3抑制剂TLR3i处理,抑制了TLR3的表达和炎症因子的分泌。结论:1.在单纯疱疹病毒性脑炎的小胶质细胞模型中,发生了高尔基体应激反应,高尔基体基质蛋白GM130表达水平降低;2.GM130通过调控TLR3的表达影响炎症因子IFN-β、TNF-α、IL-6的分泌和病毒的复制。图8个;表6个;参考文献51篇