槟榔碱通过抑制miR-203a-5p靶向调控PTK2在促进BMFs活化中的作用研究

作     者：蔡芸舟 

作者单位：中南大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王月红

授予年度：2022年

学科分类：1003[医学-口腔医学] 100302[医学-口腔临床医学] 10[医学] 

主      题：槟榔碱 PTK2 miR-203a-5p 

摘      要：背景:口腔黏膜下纤维化(Oral submucosal fibrosis,OSF)是一种进程较慢、能向口腔鳞状细胞癌进行一定的转化、主要发生在口腔颊黏膜的疾病。其发病率和进展与咀嚼槟榔密切相关,关于其发病机制目前研究尚未阐明。现有研究表明,微小RNA(micro RNA)与口腔黏膜下纤维化(OSF)的发生有关,课题组前期通过Affymetrix mi RNA芯片实验发现mi R-203a-5p在OSF中表达显著下调,通过软件预测发现PTK2是mi R-203a-5p靶基因。因此提出猜想mi R-203a-5p是否通过靶向调控PTK2在OSF进程中发挥作用。目的:探讨槟榔碱是否会促使成纤维细胞向肌成纤维细胞活化,并明确mi R-203a-5p是否可以通过靶向调控PTK2来抑制成纤维细胞向肌成纤维细胞的活化,为OSF的防治提供新思路和理论基础。方法:采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)方法检测mi R-203a-5p在来自OSF患者的纤维化颊黏膜成纤维细胞(f BMFs),以及经不同浓度槟榔碱刺激后的正常颊黏膜成纤维细胞(BMFs)中的表达水平。应用mi R-203a-5p mimics研究其对细胞增殖能力的影响。此外,还探究了mi R-203a-5p对肌成纤维细胞的特性,如迁移、伤口愈合和胶原凝胶收缩等能力是否有影响。此外,利用荧光素酶基因报告实验、Western blot实验验证mi R-203a-5p与预期靶基因PTK2之间的靶向调控关系。检测来源于OSF组织中的成纤维细胞(f BMFs)和槟榔碱诱导后的BMFs中α-SMA和PTK2的表达,以确定它们与OSF、槟榔碱之间的关联。结果:我们检测到槟榔碱诱导过的BMFs和f BMFs中mi R-203a-5p均表达下调,结果具有统计学差异(P0.05)。槟榔碱促进成纤维细胞活化为肌成纤维细胞。过表达mi R-203a-5p后降低了细胞的迁移能力和胶原凝胶收缩能力,结果具有统计学差异(P0.05)。此外,在f BMFs和槟榔碱诱导的BMFs中,α-SMA和PTK2的表达上调,并且在转染mi R-203a-5p模拟物后,它们的表达降低,结果具有统计学差异(P0.001)。荧光素酶报告分析的结果表明PTK2是mi R-203a-5p的直接靶点。结论:槟榔碱促进成纤维细胞向肌成纤维细胞活化,mi R-203a-5p可以抑制槟榔碱诱导的肌成纤维细胞活化,mi R-203a-5p PTK2之间存在靶向调控关系。图22幅,表8个,参考文献72篇