枳实及其有效成分柚皮苷治疗术后腹腔粘连的药效和机制研究

作     者：樊玉青 

作者单位：西南交通大学 

学位级别：硕士

导师姓名：闫智勇;刘安

授予年度：2022年

学科分类：1006[医学-中西医结合] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

主      题：腹腔粘连 枳实 柚皮苷 炎症 纤维化 

摘      要：目的探究枳实和柚皮苷对术后腹腔粘连的预防和治疗作用,并基于网络药理学探究柚皮苷治疗腹腔粘连的相关机制。方法通过盲肠刮擦法建立大鼠术后腹腔粘连模型,手术24 h之后,将大鼠随机分为六组,分别灌胃不同剂量的枳实醇提物(1.58 g/kg/d,3.15 g/kg/d,6.30 g/kg/d),连续给药7天;采用苏木素-伊红(HE)染色、免疫组织化学和酶联免疫吸附试验检测相关因子;运用网络药理学分析,获取枳实的主要成分及相关靶点,收集疾病的作用靶点,并筛选枳实中直接作用于疾病腹腔粘连靶点较多化合物进行实验验证;构建PPI网络分析蛋白质相互作用,利用DAVID平台进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析可能的作用机制。对腹腔粘连模型大鼠灌胃不同剂量柚皮苷(50mg/kg/d,100 mg/kg/d,200 mg/kg/d),连续给药7天;采用HE染色观察大鼠盲肠组织病理形态和炎性细胞浸润情况;免疫组织化学检测大鼠盲肠粘连组织中MMP-9和α-SMA的表达情况;天狼猩红染色检测盲肠粘连部位胶原蛋白沉积量;免疫印迹实验检测TGF-β1和α-SMA的表达;酶联免疫吸附试验检测腹腔液中TGF-β1水平。结果枳实高剂量组能显著抑制大鼠模型中的粘附形成,并能减轻盲肠受损组织中的炎症反应,减少血清中TNF-α水平,增加盲肠粘连组织中MMP-9的表达。通过网络药理学数据分析及实验验证筛选出有效成分柚皮苷,并得到24个直接作用靶点,其中以MMP-9、TGF-β、TNF-α等为核心靶点。实验结果显示,柚皮苷各剂量组均能显著抑制大鼠模型中的粘附形成,并减轻炎症反应,可以剂量依赖性地上调MMP-9的表达,下调粘附组织中α-SMA的表达,中剂量组和高剂量组可降低盲肠组织和腹腔液中TGF-β1的表达,减少胶原蛋白的沉积。结论枳实能抑制术后腹腔粘连形成;柚皮苷能显著抑制术后腹腔粘连的形成,并通过抑制炎性细胞浸润、减少纤维化、减少胶原蛋白的沉积以及加速细胞外基质降解来减少大鼠模型中术后腹膜粘连的形成。