尼古丁经TAK1/NF-κB信号通路激活促口腔鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭的研究

作     者：叶鑫鑫 

作者单位：南昌大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张强

授予年度：2023年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：尼古丁 口腔鳞癌 细胞增殖 细胞侵袭 TAK1/NF-κB通路 

摘      要：目的:探讨尼古丁对口腔鳞癌细胞系Cal27细胞增殖、迁移与侵袭能力的作用及TAK1/NF-κB信号通路在其中的作用。方法:1.配制不同浓度的尼古丁培养Cal27细胞,一定时间后,采用CCK-8、划痕和Transwell侵袭实验检测细胞的增殖、迁移、侵袭能力。2.通过蛋白免疫印迹实验(Western blot)检测不同浓度尼古丁作用于Cal27细胞后TAK1/NF-κB通路相关蛋白TAK1、p-TAK1、p65、p-p65的表达情况。3.配制不同浓度的TAK1抑制剂(Celastrol)处理Cal27细胞,采用CCK-8实验检测其IC50值。4.Celastrol与尼古丁共同培养Cal27细胞,观察以上实验结果的变化情况。结果:1.配制0.25、0.5、1μg/mL的尼古丁培养液作用于Cal27细胞,在第24、48、72h用CCK-8实验检测其细胞活性,结果显示,Cal27细胞数随着尼古丁浓度的增大而增加,在第24h和48h,1μg/mL尼古丁与对照组相比有差异(p0.05),在第72h,三个尼古丁组与对照组相比均有差异(p0.05);划痕实验结果显示,48h后,0.5、1μg/mL尼古丁组的细胞迁移率和对照组相比明显上升,差异有统计学意义(p0.05);Transwell实验结果显示,48h后,0.25、0.5μg/mL尼古丁组的细胞侵袭数和对照组相比明显增加,差异有统计学意义(p0.05)。2.蛋白免疫印迹实验结果显示,三个尼古丁组TAK1/NF-κB信号通路相关蛋白TAK1和p65的表达量与对照组相比无差异,而p-TAK1和p-p65蛋白的表达量与对照组相比明显升高,差异有统计学意义(p0.05),其中0.5μg/mL尼古丁组差异最显著(p0.01)。3.配制0.5、1和2 μM Celastrol作用于Cal27细胞,在第48h,采用CCK-8实验检测其细胞活性,结果显示,Celastrol对细胞具有毒性作用,IC50值约为0.8 μM。4.配制0.5 μg/mL尼古丁与0.5μM Celastrol共同作用于Cal27细胞,重复上述实验,结果显示,Celastrol可逆转上述尼古丁导致的生物学特性及分子变化。结论:一定剂量范围内的尼古丁能促进口腔鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭。其作用机制可能涉及TAK1/NF-κB信号通路的激活。