木犀草素对增殖性玻璃体视网膜病变的防治作用及机制研究

作     者：陈美玲 

作者单位：南昌大学 

学位级别：硕士

导师姓名：徐柒华

授予年度：2023年

学科分类：1006[医学-中西医结合] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

主      题：增生性玻璃体视网膜病变 上皮间质转化 视网膜色素上皮细胞 木犀草素 

摘      要：目的:探索木犀草素(Luteolin)在体外对转化生长因子β2(Transforming growth factor-β,TGF-β2)诱导的视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)的抑制作用,以及体内对增生性玻璃体视网膜病变(Proliferative vitreoretinopathy,PVR)的防治作用及相关机制,为PVR的临床治疗提供新的方案。方法:本实验选用人源视网膜色素上皮细胞ARPE-19以及6-8周健康的雄性C57BL/6J小鼠作为主要的研究对象。体外实验:不同浓度的木犀草素处理ARPE-19细胞,加入或不加入TGF-β2(10ng/ml)处理。(1)进行CCK8和流式细胞学实验,评估不同浓度药物处理的细胞活性以及对周期分布的影响;(2)进行划痕实验以及Transwell迁移实验检测细胞的水平及垂直迁移能力;(3)进行胶原凝胶收缩实验评估细胞收缩的情况;(4)免疫荧光实验和蛋白印迹实验检测EMT的建模以及木犀草素的影响。体内实验:建立小鼠PVR模型,(1)28天提取小鼠视网膜,进行蛋白印迹实验检测蛋白Vimentin、α-SMA、p-ERK1/2的表达。(2)摘取眼球脱蜡、制片,进行HE染色和免疫荧光检测视网膜前膜的生成以及PVR的严重程度。结果:体外实验发现,在一定浓度范围内,木犀草素以时间和浓度依赖性抑制ARPE-19细胞增殖;12.5μM、25μM的木犀草素能够明显抑制ARPE-19细胞的水平及垂直迁移能力;12.5μM、25μM的木犀草素能够抑制TGF-β2促进的胶原凝胶的收缩;TGF-β2能够成功诱导ARPE-19的EMT,而12.5μM和25μM木犀草素能有效抑制TGF-β2诱导的ARPE-19细胞的EMT相关间充质蛋白的表达。体内研究发现,木犀草素能够抑制造模处理的动物眼内间充质蛋白的增高,并且这个过程存在p-ERK1/2的蛋白表达的下调。结论:木犀草素能够抑制体外ARPE-19细胞的增殖、迁移、收缩以及TGF-β2诱导的上皮间质转化。体内通过抑制ERK信号通路的表达,有效减缓PVR的发生发展。