韦伯灵芝化学成分及其生物活性研究

作     者：孔德仙 

作者单位：西南林业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：华燕;赵友兴

授予年度：2022年

学科分类：1006[医学-中西医结合] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

主      题：韦伯灵芝 化学成分 生物活性 作用机制 构效关系 

摘      要：韦伯灵芝(Ganoderma weberianum)属于灵芝科(Ganodermataceae)灵芝属(Ganoderma)真菌。韦伯灵芝在我国广西、贵州、海南、云南等地均有分布,在民间被用作药用真菌,也做药膳食用,具有增强活性的功效。目前,国内外对野生韦伯灵芝子实体的化学成分与生物活性研究鲜有报道。为了阐述韦伯灵芝的药用价值,本文对韦伯灵芝子实体乙醇提取物化学成分展开分离鉴定并进行生物活性评价。希望从中发现具有新颖结构和重要生物活性的化合物,阐明其药效分子基础,为其资源开发及利用提供理论依据。本研究采用反相柱层析、减压硅胶柱层析、葡聚糖凝胶柱层析和半制备高效液相色谱等技术进行化合物的分离纯化。利用NMR、红外等多种波谱技术以及电子圆二色性计算确定化合物结构。从韦伯灵芝子实体乙醇提取物中分离得到34个化合物,经鉴定为ganodeweberiols A-L(1-12),3-O-acetyl lucidumol B(13),ganoderiol B(14),lanosta-7,9(11)-dien-3β-acetyloxy-24,25,26-trihydroxy(15),3β-acetyloxylanosta-7,9(11),24E-trien-26-oic acid(16),27-nor-3β-hydroxylanosta-7,9(11),23E-trien-25-one(17),24-epi alismanol D(18),3β,15α,26-trihydroxylanosta-7,9(11),24E-triene(19),5α-lanosta-7,9(11),24E-triene-15α-26-dihydroxy-3-one(20),3β-hydroxylup-20(29)-en-28-oic acid(betulinic acid)(21),(24R)-6,9-epoxy-er gosta-7,22E-dien-3β-ol(22),3β,5α,9α-trihydroxy-(24R)-ergosta-7,22E-dien-6-one(23),3β,5α-dihydroxy-(24R)-ergosta-7,22E-dien-6-one(24),(24R)-ergosta-8,22E-die n-3β,5α,6β,7α-tetraol(25),5α,6α-epoxy-(24R)-ergosta-8(14),22E-diene-3β,7α-diol(26),(24R)-ergosta-7,22E-dien-3β,5α-diol-6,5-olide(27),3β,5α,9α,14α-tetrahydrox y-(24R)-ergosta-7,22E-dien-6-one(28),(24R)-5α,8α-epidioxyergosta-6,22E-dien-3β-ol(29),(24S)-ergosta-7,22E-dien-3β,5α,6β,9-tetraol(30),(24S)-ergosta-7,22E-die n-3β,5α,6β-triol(31),(1H-indol-3-yl)oxoacetamide(32),3-hydroxy-2-methoxy-5,6-dimethylbenzoic acid(33)和p-hydroxy benzoic acid methyl ester(34)。以上化合物均为首次从野生韦伯灵芝中分离得到,其中化合物1-12为新的羊毛甾烷型三萜。采用MTT法检测化合物细胞毒活性、肝脏葡萄糖生成抑制活性、抗炎活性,采用p-NPG法检测化合物α-葡萄糖苷酶抑制活性,采用改良后的Ellman法检测化合物乙酰胆碱酯酶抑制活性,并对降血糖活性的作用机制展开研究。发现有6个化合物具有一定细胞毒活性,其中化合物1和3对He La细胞系具有细胞毒性,IC值分别为31.6和17.0μM;化合物21显示对SGC-7901细胞系的细胞毒性,IC值为45.6μM。化合物28对He La和SGC-7901细胞系具有活性,IC值分别为6.8和22.3μM。化合物3和6在Hep G2细胞中能显著抑制胰高血糖素诱导的肝葡萄糖产生,EC值分别为42.0和85.9μM。进一步的作用机制研究表明,化合物3和6通过抑制胰高血糖素诱导的c AMP积累来抑制肝葡萄糖的产生。化合物2、7、16、17和21显示出显著的α-葡萄糖苷酶抑制活性,IC值为35.3-223.4μM,均强于阳性对照阿卡波糖(304.6μM);动力学研究表明,化合物16和21是α-葡萄糖苷酶的混合型抑制剂;采用分子对接模拟揭示了化合物16、17和21与α-葡萄糖苷酶的相互作用。构效关系分析、酶动力学及分子对接模型结果显示化合物结构中含有羰基或羧基基团对增强α-葡萄糖苷酶抑制活性起到重要的作用。化合物8具有中等抗炎活性,其IC值为40.71μM(阳性对照槲皮素:11.02μM)。所有化合物对乙酰胆碱酯酶均表现极微弱的抑制活性。