PEBP4在二乙基亚硝胺（DEN）诱导原发性肝癌中的作用及其机制的研究

作     者：金敬光 

作者单位：南昌大学 

学位级别：硕士

导师姓名：罗志军

授予年度：2023年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：肝癌 PEBP4 Akt/mTOR通路 

摘      要：目的:原发性肝癌是临床常见的恶性肿瘤,因其早期诊断困难、容易被忽视,大多患者在诊断时已发生转移,导致长期生存及预后不乐观,严重影响患者的生命健康。本课题旨在利用PEBP4基因敲除小鼠构建肝癌模型,初步探究磷脂酰乙醇胺结合蛋白4(PEBP4)在肝癌发生的作用及其分子机制,为临床上的治疗提供新的理论依据和实践指导。方法:在C57BL/6小鼠中敲除PEBP4基因,用二乙基亚硝胺(DEN)药物构建肝癌动物模型,并设立以下分组:PEBP4小鼠PBS处理组、PEBP4小鼠DEN诱导组、PEBP4PBS处理组以及PEBP4DEN诱导组。通过大体形态学、H&E、IHC等一系列手段观察PEBP4对肝癌发生的影响。此外,采用Western-blot检测PEBP4对Akt/mTOR信号通路相关指标的影响以及免疫共沉淀技术检测DEN诱导组中PEBP4与Akt、mTOR的相互作用。结果:1.与PEBP4相比,PEBP4组小鼠在DEN诱导下,肿瘤个数明显增加(P0.05)。H&E染色结果显示PEBP4DEN诱导组肝脏肿瘤边界清晰,癌细胞排列成梁状或团块状,免疫组化实验则提示了其肝癌组织中的细胞增殖能力增强。2.敲除PEBP4后,与PEBP4 DEN诱导组相比,PEBP4 DEN诱导组小鼠p-Akt和p-mTOR活性明显抑制(P0.05),其下游p-RSK2、p-S6、pSGK1、p-PKCα的蛋白表达也明显下调(P0.05)。3.动物蛋白的免疫共沉淀实验表明PEBP4、Akt、mTOR之间存在相互作用并提示相互作用受PEBP4影响,而细胞转染si-Akt用mTOR免疫沉淀则进一步提示Akt介导PEBP4与mTOR发生相互作用。结论:1.初步表明PEBP4在肝癌的发生过程中发挥促进的作用。2.PEBP4的促进作用可能通过直接与Akt/mTOR的相互作用,导致其下游通路的激活从而促进肝癌发生。