SphK1通过CLCA1调控EMT促进结直肠癌的增殖和侵袭迁移

作     者：罗世波 

作者单位：广西医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：刘诗权

授予年度：2021年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：SphK1 CLCA1 EMT 结直肠癌 侵袭转移 

摘      要：目的:研究显示SphK1调控EMT在结直肠癌转移中发挥重要作用。然而SphK1调控EMT的机制尚未阐明。CLCA1是第一个被发现的钙激活的氯离子通道调节蛋白(calcium-activated chloride channel regulator,CLCA)家族成员,参与上皮细胞膜的氯离子传导及调控肿瘤发生和转移、细胞粘附、凋亡等各种生物学过程。最近研究发现CLCA1参与调控EMT过程。本研究旨在探索SphK1对体外结直肠癌细胞HT29生长的影响及机制,为结直肠癌的预防与治疗提供理论支持。方法:利用免疫组织化学法分析CLCA1在结直肠癌及癌旁正常组织的中的表达差异。使用基因工程技术上调人结肠癌HT29细胞株的SphK1表达,使用RT-PCR和免疫印迹法检测SphK1 m RNA和蛋白的表达。采用平板克隆实验和CCK8实验观察各组结肠癌细胞的增殖情况,细胞的迁移和侵袭能力采用Transwell小室和划痕试验检测,免疫印迹法检测CLCA1及EMT相关蛋白的表达情况。结果:(1)免疫组织化学染色结果显示CLCA1在结肠癌中表达较癌旁正常组织减弱。(2)克隆形成实验显示,相比于空白对照组(CON组)及转染阴性对照组(NC组),过表达SphK1组的克隆形成数显著提高。(3)CCK8实验显示,与CON组及NC组相比,过表达SphK1组的细胞OD 450 nm值显著提高。(4)划痕试验显示,与CON组及NC组相比,过表达SphK1组的伤口愈合率显著提高。(5)Transwell小室实验显示,与CON组及NC组相比,过表达SphK1组的细胞迁移及侵袭数量显著增加。(6)免疫印迹实验显示,过表达SphK1后CLCA1和E-cadherin蛋白的表达减少,vimentin蛋白的表达增加。结论:SphK1可能通过CLCA1促进EMT而促进结直肠癌细胞的增殖及侵袭迁移。