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现代肿瘤医学 2021年第16期29卷 2845-2849页

作者：邱贺廉洁杨静怡罗玉梅师文任晓阳初大可西安交通大学第一附属医院陕西西安710061

目的:探讨clca1在结肠癌组织中的表达水平及其与肿瘤进展和预后的关系。方法:随机选取西安交通大学第一附属医院及第四军医大学西京医院行手术切除的临床结肠癌病例239例,应用免疫组织化学方法检测结肠癌组织及癌旁组织中clca1的表达情... 详细信息

目的:探讨clca1在结肠癌组织中的表达水平及其与肿瘤进展和预后的关系。方法:随机选取西安交通大学第一附属医院及第四军医大学西京医院行手术切除的临床结肠癌病例239例,应用免疫组织化学方法检测结肠癌组织及癌旁组织中clca1的表达情况,使用统计学方法分析clca1在结肠癌中的表达与肿瘤临床病理特征及预后的相关性。结果:clca1在肿瘤中的表达较癌旁组织显著降低(Pclca1在结肠癌中表达与原发肿瘤浸润深度、淋巴转移和肿瘤TNM分期显著相关(Pclca1低表达组患者总体生存期较高表达组显著缩短(P1),多因素分析显示clca1的表达可作为结肠癌的独立预后因素。结论:clca1在结肠癌中表达下调,clca1的低表达与肿瘤的侵袭转移和临床预后密切相关,有望作为结肠癌个体化治疗靶点。

关键词：结肠癌 clca1 侵袭转移预后

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凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)盐度调控相关基因clca1的克隆及表达分析

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基因组学与应用生物学 2021年第3期40卷 1067-1076页

作者：温贝妮刘红赵宇唐芳朱启飞上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心上海201306

钙激活氯离子通道调节剂(calcium-activated chloride channel regulator,clca)为一类金属蛋白酶依赖家族,在哺乳动物上皮组织杯状细胞的粘液产生和粘液平衡中起重要作用。为了探究clca1基因在凡纳滨对虾渗透压中的作用机制,本研究采用R... 详细信息

钙激活氯离子通道调节剂(calcium-activated chloride channel regulator,clca)为一类金属蛋白酶依赖家族,在哺乳动物上皮组织杯状细胞的粘液产生和粘液平衡中起重要作用。为了探究clca1基因在凡纳滨对虾渗透压中的作用机制,本研究采用RACE技术在凡纳滨对虾中克隆出了clca1基因,该基因总长度为3129 bp,5'端非编码区长度为175 bp,3'端非编码区长度为107 bp,开放阅读框ORF长度为2847 bp,共编码984个氨基酸,有1个跨膜区域,膜外有VMA结构域。与其他物种氨基酸序列比对结果显示,凡纳滨对虾clca1氨基酸与其他物种相似性都较低,相似度最高的为刀额新对虾(Procambarus clarkii)clca2氨基酸序列,为47.83%。RT-qPCR结果显示,clca1基因在凡纳滨对虾各组织中均有表达,其中肠道、肝胰腺和鳃中的表达量较高;对不同盐度下凡纳滨对虾4个组织中clca1基因的定量结果显示,随着盐度的下降,clca1基因的表达量在4个组织中呈下调趋势,表明clca1基因与凡纳滨对虾的渗透压调节相关。本研究初步阐明了clca1基因的理化性质,对clca1基因在凡纳滨对虾体内各组织和不同盐度下各组织的表达定量可为clca1基因在今后甲壳动物的渗透压调节及免疫调节的研究提供基础支持。

关键词：凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei) clca1 渗透压调节基因克隆

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clca1对胃细胞功能的影响及促进胃肠上皮化生发生的分子机制

CLCA1对胃细胞功能的影响及促进胃肠上皮化生发生的分子机制

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作者：李婷婷遵义医科大学

学位级别：硕士

背景和目的:胃肠上皮化生是一种临床常见的胃部病变,与胃癌的发生密切相关。胃肠上皮化生的机制仍然未完全阐明。clca1是一种氯离子通道调节蛋白,GEO数据库显示clca1在胃肠上皮化生组织中明显上调,提示clca1可能参与了胃肠上皮化生的发... 详细信息

背景和目的:胃肠上皮化生是一种临床常见的胃部病变,与胃癌的发生密切相关。胃肠上皮化生的机制仍然未完全阐明。clca1是一种氯离子通道调节蛋白,GEO数据库显示clca1在胃肠上皮化生组织中明显上调,提示clca1可能参与了胃肠上皮化生的发生发展。本研究旨在探索clca1对一系列细胞功能学的影响及其促进胃肠上皮化生发生发展过程中的分子机制研究,从而为胃肠上皮化生的防治提供更多的理论依据。方法:本实验主要包括三个部分。1.第一部分通过免疫组织化学技术检测clca1在人正常胃黏膜组织、非萎缩性胃炎、肠上皮化生及胃癌组织中的蛋白表达水平。2.第二部分关于clca1对胃正常黏膜细胞及胃癌细胞功能学的影响。(1)通过Western-Blot技术检测clca1蛋白在人正常胃黏膜细胞株GES-1和人胃癌细胞株SGC-7901、MKN28、BGC-823、MKN45、AGS中的表达情况。(2)运用慢病毒在GES-1细胞中过表达及沉默clca1,并通过96孔板倍比稀释法挑选单克隆稳转株.通过q RT-PCR筛选出高转染效率的单克隆稳转株。(3)检测clca1对GES-1细胞的生物学行为的影响:运用CCK8增殖实验及生长曲线检测细胞增殖;应用平板集落形成实验检测细胞集落形成能力;运用细胞划痕实验及Transwell实验检测细胞迁移和侵袭;运用流式双染法(Annexin V-FITC/PI)检测细胞凋亡。(4)运用慢病毒感染AGS细胞,通过q RT-PCR验证AGS细胞沉默clca1基因是否成功;运用CCK8增殖实验检测细胞增殖;运用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭。(5)运用慢病毒感染MKN28细胞株,通过q RT-PCR验证MKN28细胞过表达clca1基因是否成功;运用CCK8增殖实验检测细胞增殖;运用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭。3.第三部分关于clca1促进胃肠上皮化生发生的分子机制及相关通路研究。(1)运用q RT-PCR及Western-Blot技术检测GES-1细胞过表达及沉默clca1,检测肠化生相关基因(CDX2、MUC2、MUC5AC、TFF2、KLF4),研究clca1对肠化相关基因的调控作用。(2)运用Western-Blot技术检测GES-1细胞过表达及沉默clca1对STAT3磷酸化蛋白及CDX2、TFF2及KLF4蛋白表达的影响情况。通过使用STAT3通路抑制剂检测GES-1细胞的STAT3磷酸化水平及CDX2、TFF2、KLF4蛋白表达的改变,研究clca1促进肠上皮化生的机制。(3)进行IL-13细胞诱导实验,检测IL-13对clca1的诱导作用及促进肠化生的相关机制研究。结果:1.第一部分:免疫组化的结果显示clca1在人胃肠上皮化生中表达显著高于人胃正常黏膜组织,胃炎组织及胃癌组织(P1)。2.第二部分:(1)Western-Blot的结果显示clca1在人胃黏膜细胞GES-1和人胃癌细胞AGS、MKN28、MKN45、SGC-7901、BGC-823中均有表达,clca1在AGS细胞中表达最高,在MKN28细胞中表达最低,在GES-1细胞中表达居中。(2)通过过q RT-PCR及Western-Blot在GES-1细胞过表达和沉默clca1中,筛选出多个转染效率高的单克隆稳转株。(3)在GES-1细胞中筛选的单克隆稳转株进行各项细胞功能学结果显示如下:CCK-8结果显示:clca1过表达促进了GES-1细胞增殖(pclca1沉默抑制了GES-1细胞增殖(p1);生长曲线的结果显示:clca1过表达促进细胞增殖明显增多(p1);平板集落形成实验结果显示:过表达clca1促进GES-1细胞集落数及面积增加(pclca1促进了GES-1细胞的迁移(pclca1促进了GES-1细胞的迁移和侵袭(p1);流式细胞术检测细胞凋亡的结果显示:clca1抑制了GES-1细胞的早期凋亡和晚期凋亡(p1)。(4)q RT-PCR的结果显示:在AGS细胞中沉默clca1,clca1m RNA水平明显下调(p1);CCK-8结果显示:沉默clca1抑制了AGS细胞的增殖(p1);Transwell实验结果显示:沉默clca1抑制了AGS细胞的迁移和侵袭(p1)。(5)q RT-PCR的结果显示:在MKN28细胞中过表达clca1,clca1m RNA水平明显上调(p1);CCK-8结果显示:clca1过表达促进MKN28细胞的增殖(p1);Transwell结果显示:过表达clca1促进MKN28细胞的迁移和侵袭(p

关键词： clca1 CDX2 STAT3 IL-13 胃肠化生

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SphK1通过clca1调控EMT促进结直肠癌的增殖和侵袭迁移

SphK1通过CLCA1调控EMT促进结直肠癌的增殖和侵袭迁移

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作者：罗世波广西医科大学

学位级别：硕士

目的:研究显示SphK1调控EMT在结直肠癌转移中发挥重要作用。然而SphK1调控EMT的机制尚未阐明。clca1是第一个被发现的钙激活的氯离子通道调节蛋白(calcium-activated chloride channel regulator,clca)家族成员,参与上皮细胞膜的氯离子... 详细信息

目的:研究显示SphK1调控EMT在结直肠癌转移中发挥重要作用。然而SphK1调控EMT的机制尚未阐明。clca1是第一个被发现的钙激活的氯离子通道调节蛋白(calcium-activated chloride channel regulator,clca)家族成员,参与上皮细胞膜的氯离子传导及调控肿瘤发生和转移、细胞粘附、凋亡等各种生物学过程。最近研究发现clca1参与调控EMT过程。本研究旨在探索SphK1对体外结直肠癌细胞HT29生长的影响及机制,为结直肠癌的预防与治疗提供理论支持。方法:利用免疫组织化学法分析clca1在结直肠癌及癌旁正常组织的中的表达差异。使用基因工程技术上调人结肠癌HT29细胞株的SphK1表达,使用RT-PCR和免疫印迹法检测SphK1 m RNA和蛋白的表达。采用平板克隆实验和CCK8实验观察各组结肠癌细胞的增殖情况,细胞的迁移和侵袭能力采用Transwell小室和划痕试验检测,免疫印迹法检测clca1及EMT相关蛋白的表达情况。结果:(1)免疫组织化学染色结果显示clca1在结肠癌中表达较癌旁正常组织减弱。(2)克隆形成实验显示,相比于空白对照组(CON组)及转染阴性对照组(NC组),过表达SphK1组的克隆形成数显著提高。(3)CCK8实验显示,与CON组及NC组相比,过表达SphK1组的细胞OD 450 nm值显著提高。(4)划痕试验显示,与CON组及NC组相比,过表达SphK1组的伤口愈合率显著提高。(5)Transwell小室实验显示,与CON组及NC组相比,过表达SphK1组的细胞迁移及侵袭数量显著增加。(6)免疫印迹实验显示,过表达SphK1后clca1和E-cadherin蛋白的表达减少,vimentin蛋白的表达增加。结论:SphK1可能通过clca1促进EMT而促进结直肠癌细胞的增殖及侵袭迁移。

关键词： SphK1 clca1 EMT 结直肠癌侵袭转移

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循经取穴对心肌缺血大鼠心肌组织氯通CFTR、clca1调控基因表达的影响

循经取穴对心肌缺血大鼠心肌组织氯通CFTR、CLCa1调控基因表达的...

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作者：武林辽宁中医药大学

学位级别：硕士

目的：本实验以异丙肾诱发心肌缺血大鼠为模型，观察循经取穴对大鼠心肌组织蛋白激酶PKC、PKG蛋白表达与氯离子(CL-)通道CFTR、clca1调控基因表达的影响，探讨经穴效应循经特异性机制，为针刺治疗心肌疾病提供科学的实验依据。材料与... 详细信息

目的：本实验以异丙肾诱发心肌缺血大鼠为模型，观察循经取穴对大鼠心肌组织蛋白激酶PKC、PKG蛋白表达与氯离子(CL-)通道CFTR、clca1调控基因表达的影响，探讨经穴效应循经特异性机制，为针刺治疗心肌疾病提供科学的实验依据。材料与方法：SPF级SD大鼠70只，健康雄性，随机选取10只大鼠为正常对照组，常规饲养。其余大鼠随机分为4组。分别为模型组（15只）、内关穴组（15只）、列缺穴组（15只）、非经非穴组（15只），分笼饲养，常规饮食。除正常组外，其余四组均采用多点皮下注射异丙肾上腺素（ISO）方法复制成心肌缺血模型。内关穴组、列缺穴组、非经非穴组分别电针双侧内关穴、列缺穴、非经非穴，每天治疗一次，每次20分钟，持续一周。针刺一周后，采用BL-420S生物机能实验系统软件对各组大鼠心电图进行检测，以mV数作为指标进行记数比较。采用Western Blot免疫印迹法检测大鼠心肌组织氯离子通道蛋白激酶PKC、PKG蛋白的表达水平。采用RT-PCR（Real time-PCR）检测大鼠心肌组织氯离子通道囊性纤维化跨膜转导调节因子（CFTR）、clca1基因的表达水平。结果： 1.与正常组比较，模型组、列缺组和非经非穴组心肌细胞的心电图有改变，但测量数据差异没有统计学意义（P＞0.05）;与模型组比较，内关组则有明显改善，测量数据差异具有统计学意义（P＜0.05）。 2.与正常组比较，模型组、列缺穴组及非经非穴组大鼠心肌蛋白激酶PKG、PKC蛋白表达量显著升高，差异具有统计学意义（P＜0.01）;与模型组比较，内关组大鼠心肌蛋白激酶PKG、PKC蛋白表达量升高，差异具有统计学意义（P＜0.05）。 3.与正常组比较，模型组、列缺穴组、非经非穴组大鼠心肌组织中氯离子通道CFTR、clca1基因表达显著增强，差异具有统计学意义（P＜0.01）;与模型组比较，内关组大鼠心肌组织中氯离子通道CFTR、clca1基因表达显著减弱，差异具有统计学意义（P＜0.01）。结论： 1.针刺内关穴能有效的抑制异丙肾性心肌缺血大鼠心电图改变。 2.针刺内关穴可以升高心肌蛋白激酶PKG、PKC蛋白表达量，对心肌功能损伤具有保护作用。 3.针刺内关穴可以调节氯离子通道CFTR、clca1基因表达的含量，从而调节心肌组织氯离子通道，这可能是减轻心肌缺血引起的心肌损伤的机制之一。 4.针刺内关穴防治心肌缺血具有循经特异性效应。

关键词：针刺心肌缺血内关穴 CFTR clca1 PKG PKC

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