川续断皂苷Ⅵ对小鼠脓毒症的保护作用及其机制研究

作     者：庞彩霞 

作者单位：南方医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：周春

授予年度：2022年

学科分类：1006[医学-中西医结合] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

主      题：脓毒症 炎症 川续断皂苷Ⅵ Hippo 信号通路 RhoC 

摘      要：脓毒症(sepsis)是一类由病原体感染所致的全身性炎症反应综合征,常伴有多器官功能障碍。目前治疗脓毒症的主流方式仍为支持疗法和抗生素应用,但由于其复杂的发病机制,该病的死亡率和发病率一直都居高不下,已经成为重症监护病人死亡的主要原因,也一直是临床医学领域关注的焦点。脓毒症一旦没有得到及时的干预,会从早期的高炎症状态演变成随后的低炎症状态,极易引发严重脓毒症休克甚至多器官功能障碍。川续断皂苷Ⅵ(AⅥ)是一种三萜皂苷类化合物,已被证明在神经炎、心肌炎、骨质疏松等炎症疾病上有明显的抗炎免疫作用。然而,AⅥ在脓毒症中的作用及潜在机制尚不清楚。本研究通过同时采用LPS诱导脓毒症和盲肠结扎穿刺术(CLP)诱导脓毒症的方法建立炎症小鼠模型,考察AⅥ在脓毒血症小鼠中的作用以及可能的作用机制。研究方法:1.体外实验,利用LPS刺激的骨髓单核巨噬细胞(BMMs)和THP-1来源巨噬细胞诱导细胞炎症模型,使用川续断皂苷Ⅵ对其进行药物干预,实验分组为空白对照组(Blank),LPS模型组(LPS),LPS+川续断皂苷Ⅵ组(AⅥ),LPS+乌司他丁阳性药物组(UTI)。通过实时荧光定量PCR和Western blot检测AⅥ对LPS诱导炎症的保护作用。2.体内实验,通过采用CLP和LPS诱导脓毒症模型相结合的方法,探讨AⅥ对小鼠脓毒症的作用及作用机制。CLP诱导脓毒症模型动物分组包括:空白对照组(Blank)、CLP 模型组(CLP)、CLP+AⅥ低高剂量组(A10:10mg/kg/d、A20:20mg/kg/d)、CLP+乌司他丁阳性药物组(UTI:5×104U/kg)。LPS 诱导脓毒症模型动物分组包括:空白对照组(Blank)、LPS模型组(LPS)、LPS+AⅥ低高剂量组(A10:1 Omg/kg/d、A20:20mg/kg/d)、LPS+乌司他丁阳性药物组(UTI:5×104U/kg)。在造模前14天开始灌胃给药处理,每天一次。术后测定小鼠肛门温度和对小鼠进行行为学评分;检测小鼠腹腔灌洗液细菌含量;ELISA检测血浆中炎症因子水平;测定血浆中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)和乳酸脱氢酶(LD)含量;评价肺组织的干、湿重比;对小鼠的肝、脾、肺进行H&E染色。采用Western blot、实时荧光定量PCR和免疫组化检测脾和肺组织中信号通路的变化。研究结果:1.在体外,与LPS组相比,AⅥ和UTI预处理后能明显抑制炎症因子的表达。而AⅥ能通过调控Hippo信号通路和Rho家族抑制炎症的发生发展。2.体内实验中,AⅥ和UTI均可抑制CLP和LPS诱导脓毒症小鼠的炎症因子的表达,降低腹腔灌洗液中的细菌含量。此外,药物预处理后减轻了脓毒症引起的肝、脾、肺损伤,并减少了炎症反应。而且这些保护作用是对Hippo信号通路和Rho家族的抑制介导的。研究结论:1.AⅥ对脓毒血症小鼠具有保护作用,能抑制脓毒症小鼠的炎症反应,并减少小鼠腹腔灌洗液中细菌的含量。2.AⅥ的预防治疗能减轻脓毒症引起的器官损伤,并减少炎症反应。3.在脓毒症模型中,AⅥ能显著抑制Hippo信号通路以及Rho家族,保护小鼠免受侵害。