海马TRPV4在东莨菪碱所致小鼠认知功能障碍中的研究

作     者：邓颖成 

作者单位：南华大学 

学位级别：硕士

导师姓名：万炜

授予年度：2022年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100205[医学-精神病与精神卫生学] 10[医学] 

主      题：阿尔茨海默病 认知功能障碍 TRPV4 HC067047 SCP 

摘      要：【目的】探讨海马TRPV4在东莨菪碱所致小鼠认知功能障碍中的作用及其可能分子机制。【方法】1)动物分组:8周龄ICR雄性小鼠(35-40g),随机分为生理盐水组(NS)、模型(SCP+NS)、HC067047药物干预组(SCP+HC067047);2)动物模型的建立:给予小鼠单次腹腔注射东莨菪碱(Scopolamine,SCP),建立实验动物模型;3)TRPV4特异性抑制剂HC067047干预:给予小鼠腹腔注射TRPV4抑制剂HC067047(10mg/kg),7小时后,腹腔注射SCP建模。4)行为学检测:使用新旧位置识别实验、新旧事物识别实验、Y-maze实验(非自发交替)评估小鼠的学习记忆能力;5)采用免疫组织化学法检测小鼠海马Neu N,DCX的表达;采用Weastern blotting法检测海马β-Tubulin、TRPV4、Camk IIα、p-Camk IIα、Caspase-3、Bax、Bcl-2、ACh E、PSD-95、SYP、CD68、IL-1β、BACE-1、APP、Tau、pTau的表达。【结果】1)与NS组小鼠相比,SCP组小鼠海马TRPV4蛋白(P0.05)表达水平明显上调;2)与NS组小鼠相比,SCP+NS组小鼠新位置识别指数明显下调(P0.001),新物体识别指数明显下降(P0.01),在新臂所花费的时间明显减少(P0.05),而TRPV4特异性抑制剂HC067047处理可以改善小鼠上述认知功能障碍(P0.05);3)与NS组小鼠相比,SCP+NS组小鼠海马内ACh E蛋白表达水平明显上调(P0.05),而HC067047干预后,ACh E蛋白水平明显下降(P0.01);4)与NS组小鼠相比,各组小鼠海马内PSD95、SYP、Glu R1、Glu R2突触蛋白水平并没有明显变化ns P);5)与NS组相比,SCP+NS组小鼠海马内DCX和Neu N阳性细胞数显著减少(P0.05),HC067047干预后,小鼠海马内DCX和Neu N阳性细胞数明显增加(P0.05);6)与NS组小鼠相比,SCP+NS组小鼠海马内Camk IIα、p-Camk IIα、Caspase-3、Bax蛋白水平明显上调(P0.05),药物HC067047干预后,小鼠海马内Camk IIα、p-Camk IIα、Caspase-3、Bax表达显著下降(P0.05),而各组小鼠海马内Bcl-2蛋白表达无显著差异(ns P);7)与NS组小鼠相比,SCP+NS组小鼠海马内Bax/Bcl-2比值明显增加(P0.01),HC067047干预后,小鼠海马内Bax/Bcl-2比值显著减低(P0.01);8)与NS组相比,各组小鼠海马内Tau、p-Tau、BACE1、APP蛋白表达无显著差异;9)与NS组相比,各组小鼠海马内CD68、IL-1β蛋白表达无统计学意义。【结论】TRPV4过表达可能激活下游效应分子钙调蛋白,进而促使凋亡相关蛋白高表达,诱发神经元兴奋性死亡,最终导致小鼠认知功能障碍;阻断TRPV4可改善小鼠认知功能障碍。