硒化党参多糖对骨髓树突状细胞功能的调控及机制研究

作     者：景丽荣 

作者单位：内蒙古农业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：杨英;高珍珍

授予年度：2022年

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

主      题：硒化党参多糖 树突状细胞 免疫调节 

摘      要：硒化多糖具有增强机体免疫功能及抗氧化、抗肿瘤、降血糖和降血脂等多种药理作用,其生物活性高于硒和多糖各自的单独作用。本试验先以水提醇沉法提取党参粗多糖,TCA除蛋白,DEAE-52、G-200分离提纯,后采用硝酸-亚硒酸钠法对党参多糖进行硒化修饰,在此些方法上开展党参多糖硒化修饰前后对树突状细胞功能的影响及机制研究。旨在提高党参多糖的生物活性,为研制多糖类中药免疫增强剂提供理论依据。结果显示:1.党参粗多糖和除蛋白后的党参多糖的得率分别为:10.92%,4.2%;糖含量分别为43.36%,57.40%;DEAE-52经HO洗脱的多糖糖得率和糖含量最高,分别为2.54%和83.81%;G-200对党参多糖进一步分离纯化,糖得率和糖含量分别为52.36%和98.86%。2.硒化后的党参多糖硒含量为12.11 mg/g,用扫描电镜观察表型、傅里叶变换红外光谱法提示特征吸收峰、高效凝胶渗透色谱法检测其分子量、PMP柱前衍生法分析其单糖组成并结合核磁共振波谱法鉴定其C、H结构,发现硒化党参多糖是光滑致密表面的片状结构,有Se=O和Se-O-C特征吸收峰,其分子量小于1.0 KD,主要含有Glu、Gal、Ara、Man和Glc N等,为α和β构型多糖。3.用流式细胞术检测s CPPS对未成熟BMDCs的吞噬活性和成熟BMDCs表型的影响,发现s CPPS在浓度15.63-1.96μg/m L时,可显著增强未成熟BMDCs的吞噬活性,显著增加成熟BMDCs的表型MHCⅡ、CD86、CD80和CD40的表达量,并显著提高细胞上清液中IFN-γ、IL-12和IL-1β的含量,及显著增强BMDCs刺激同种异体淋巴细胞增殖和抗原递呈能力。4.用Western Blot法检测s CPPS对My D88/NF-κB信号通路的影响,发现s CPPS能显著提高My D88/NF-κB信号通路上My D88、NF-κB P65和NF-κB P-P65蛋白的表达。结论:1.采用硝酸-亚硒酸钠法制备硒化党参多糖,通过鉴定其结构,表明党参多糖硒化修饰成功。2.s CPPS较CPPS可显著增强BMDCs未成熟和分化成熟后的功能,说明硒化修饰的党参多糖能增强机体的免疫功能。3.s CPPS对BMDCs功能调控的作用机制是通过激活My D88/NF-κB信号通路实现的。