抗结肠癌纳米紫杉醇与PI3K/mTOR双通路抑制剂BEZ235复方制剂临床前关键技术研究

作     者：朱星瑶 

作者单位：石河子大学 

学位级别：硕士

导师姓名：邹泓;赵瑾

授予年度：2022年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：结肠癌 紫杉醇 BEZ235 纳米复方制剂 抗肿瘤耐药 

摘      要：目的:为寻找新的可能克服结肠癌多药耐药的高效低毒药物,前期研究我们已经发现并证实了紫杉醇(PTX)和BEZ235联合,可以有效协同抑制结肠癌HCT116、HT-29细胞及相应铂类耐药细胞,应用纳米乳剂载入紫杉醇联用BEZ235可进一步增敏增效。本研究旨在前期研究结果的基础上,探索进一步优化制备复方紫杉醇-BEZ235纳米制剂,开展其潜在临床转化前关键参数研究。方法:采用低能自发乳化法生产纳米药物,并通过马尔文激光粒度分析仪对纳米复方制剂的平均粒径、粒径分布及稳定性进行研究;尼罗红荧光染色纳米制剂,加入结肠癌细胞后,观察细胞对纳米制剂的摄取能力;用CCK8法检测、比较对照组、单药组、双药联合组、纳米负载单药组、纳米紫杉醇单药联用BEZ235组及纳米复方制剂组之间对结肠癌普通及耐药细胞抑癌作用的影响;用蛋白质印迹试验(Western blot)、流式细胞实验分析比较对照组、单药组、双药联合组、纳米负载单药组、纳米紫杉醇单药联用BEZ235组及纳米复方制剂组之间对肿瘤细胞PI3K/Akt/m TOR信号通路关键蛋白、细胞干性相关蛋白、耐药相关蛋白及细胞周期的影响,初步探讨其协同抗癌机制;应用临床新鲜结肠癌组织样本培养结肠癌原代细胞,进行复方纳米制剂抗肿瘤效应的验证研究。结果:(1)制备的纳米复方制剂平均粒径在100-200n M,多分散指数(PDI)0.142-0.202,在4℃环境下能稳定存在;(2)通过尼罗红荧光染色,发现纳米乳剂可大量聚集在肿瘤细胞细胞核周围,表明药物能够被肿瘤细胞充分摄取;(3)纳米复方制剂对结肠癌细胞HT29和HCT116以及耐顺铂/奥沙利铂细胞HT29-DDP和HCT116-LOHP出现显著协同抗肿瘤作用(CI1),相同浓度下纳米复方制剂中PTX和BEZ235比例为1:10时效果最好,其IC50下降为紫杉醇单药及纳米紫杉醇单药联用BEZ235的约1/5、3/5,且CCK8法检测其抗肿瘤增殖效果优于白蛋白-紫杉醇(Nab-PTX),其IC50下降约为Nab-PTX的1/5;(4)Western blot实验显示复方制剂1:10组对PI3K/Akt/m TOR信号通路关键蛋白p-AKt及PI3K、细胞干性相关蛋白CD133及CD44和结肠癌耐药相关蛋白P糖蛋白(Pgp)及多药耐药相关蛋白1(ABCC1)的表达抑制作用最明显,各组差异具有统计学意义(P0.05);(5)流式检测结果显示,在相同用药浓度下复方制剂1:10组促细胞凋亡效果最佳;(6)在人结肠癌原代细胞中验证药物抗肿瘤效应,同样发现以复方制剂1:10组作用最佳。结论:纳米PTX-BEZ235复方制剂较PTX单药及纳米单药组对结肠癌细胞的杀伤效果更佳,可能通过抑制耐药蛋白来降低结肠癌细胞的耐药性、抑制肿瘤干性、诱导细胞凋亡发挥协同作用。