LINC-ROR介导的MICB降低在胃癌免疫逃避中的作用及机制研究

作     者：牛庆斌 

作者单位：滨州医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：胡宝光;杜静

授予年度：2021年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：LINC-ROR MICB RXRA NK细胞和免疫逃避 

摘      要：目的:探讨LINC-ROR下调胃癌细胞表面MICB实现免疫逃避中的作用及机制,为进一步揭示胃癌细胞免疫逃避的机制及寻找有效治疗靶点提供理论与实验依据。方法:首先,将胃癌细胞SCG-7901与过表达LINC-ROR的SCG-7901分别与NK-92细胞共培养,通过检测NK细胞共培养后胃癌细胞的存活情况及培养液中乳酸脱氢酶的表达水平,确定胃癌细胞可以逃避NK细胞免疫杀伤。其次,过表达LINC-ROR后运用RT-qPCR和Western blot检测MICB的表达情况。然后通过JASPER和PROMO转录因子预测网站预测潜在的MICB转录因子,二者取交集并通过RPISeq网站进一步确定预测到的转录因子与MICB及LINC-ROR的结合关系。随后,过表达LINC-ROR后通过Western-blot和RT-qPCR检测MICB和转录因子RXRA、YY1的表达情况;最后,用蛋白酶体抑制剂MG-132抑制蛋白酶体作用后,检测RXRA及MICB表达水平的改变。结果:NK细胞共培养实验表明,相对于空白对照组胃癌细胞,过表达LINC-ROR组的胃癌细胞有更低的NK细胞杀伤率(P=0.0232)和更低的LDH释放量(P0.0001)。过表达LINC-ROR后,MICB的mRNA和蛋白表达量均显著减低(mRNA:P=0.004;蛋白:P=0.043)。通过预测软件并取交集后,预测到10个转录因子,随后进一步通过RPISeq验证潜在转录因子与LINC-ROR的互作关系,得到RXRA和YY1两个转录因子构成LINC-ROR--转录因子--MICB的互作网络。过表达LINC-ROR后,YY1的mRNA和蛋白的表达水平无显著变化;RXRA的mRNA水平无显著变化而蛋白水平显著下降(P=0.0126);应用MG-132抑制蛋白酶体的作用后,RXRA和MICB低表达恢复为正常表达。结论:***-ROR可以降低NK细胞对胃癌细胞SCG-7901的免疫杀伤作用。***-ROR降低NK细胞对SCG-7901的杀伤作用可能是通过降低其细胞表面的MICB实现的。***-ROR可能通过泛素化RXRA来降低其表达水平进而从蛋白水平降低MICB的表达。