多酚氧化酶对不同肿瘤细胞作用机制的研究
作者单位:上海应用技术大学
学位级别:硕士
导师姓名:韩建秋
授予年度:2022年
学科分类:1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学]
摘 要:癌症是目前人类患病率和死亡率极高的一种疾病,随着经济和社会的发展,癌症的发病率每年都呈现上升的趋势。多酚氧化酶(Polyphenol oxidase,PPO)是菌菇的化合物之一,同时它也是一种末端氧化酶。目前关于PPO的相关研究有很多,但是关于PPO抗癌性的研究几乎未见报道。本研究主要研究菌菇PPO对不同肿瘤细胞的抗性研究,主要分为体外PPO的抗肿瘤研究、PPO的抗肿瘤机制研究和体内PPO的抗肿瘤研究三个部分。(1)体外PPO的抗肿瘤研究该研究使用的细胞是正常细胞3T3,GES-1和乳腺肿瘤细胞4T1,T-47D,MCF-7;前列腺肿瘤细胞C4-2,DU145;卵巢肿瘤细胞A2780,SK-OV-3,OV8,Hey;肺肿瘤细胞A549,PC9。本章通过CCK8增殖试验、划痕试验、Transwell试验、克隆试验检测经PPO对目的细胞增殖、迁移、侵袭、克隆的影响。结果表明PPO可以有效的抑制乳腺、肺、卵巢和前列腺肿瘤细胞的增殖,并且其抑制效果具有显著的剂量依赖性;PPO可有效抑制肿瘤细胞4T1,A549和C4-2的迁移,并且PPO对肿瘤细胞A549、C4-2、4T1迁移的抑制作用依次增强;PPO可有效抑制肿瘤细胞4T1,A549和C4-2的侵袭,并且PPO对肿瘤细胞A549,4T1,C4-2侵袭的抑制作用依次增强;PPO可有效抑制肿瘤细胞4T1,A549和C4-2的克隆。(2)PPO的抗肿瘤机制研究该研究使用的细胞是正常细胞GES-1和乳腺肿瘤细胞4T1,前列腺肿瘤细胞C4-2,肺肿瘤细胞A549。本章通过流式细胞技术、蛋白免疫印迹(WB)、实时荧光定量核酸扩增(q PCR)检测PPO对目的细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡相关基因和蛋白表达的影响情况。通过分析试验结果得出PPO可有效促进肿瘤细胞4T1,A549和C4-2的凋亡,并且其促进效果具有显著的剂量依赖性。但是,对于正常细胞GES-1而言,PPO对它凋亡的情况没有显著的影响。PPO可显著抑制肿瘤细胞4T1,A549和C4-2中p53基因的表达,但是只有在高浓度才会对正常细胞GES-1中p53基因的表达表现出抑制作用;另外,PPO可显著促进肿瘤细胞4T1,A549和C4-2中E-cadherin基因的表达,但是低浓度的PPO对GES-1细胞中E-cadherin基因的表达没有显著影响;与此同时,PPO可显著地抑制肿瘤细胞中Bcl-2基因的表达。(3)体内PPO的抗肿瘤研究该研究在体外试验的基础上进行,雌性BALB/c小鼠(18-25g,6-8周)用于体内试验,试验分为对照组、顺铂组、25mg/kg的低剂量组和50mg/kg的高剂量组,试验过程中对小鼠进行体重和肿瘤体积的测量,最后进行肿瘤组织的采集。结果表明PPO对实验小鼠的体重和生存率不具有显著的影响,但是可显著地抑制肿瘤体积的增长以及体重的增长。综上所述,PPO可显著地抑制不同肿瘤细胞的增殖,抑制肿瘤细胞C4-2,A549,4T1的迁移、侵袭、克隆,并且可显著地促进肿瘤细胞C4-2,A549,4T1的凋亡。体内试验也证实PPO可有效地抑制肿瘤的增长。由此可知,PPO对肿瘤细胞有明显的抗性。