心房利钠肽对阿勒泰羊尾脂脂肪细胞脂质代谢的影响及其作用机制的研究

作     者：马昕 

作者单位：新疆农业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：陈勇

授予年度：2022年

学科分类：0905[农学-畜牧学] 09[农学] 

主      题：心房利钠肽 尾脂脂肪细胞 脂代谢指标 转录组测序 脂质代谢组学 脂解 

摘      要：心房利钠肽(ANP)是一种强效脂解剂,本研究旨在探究添加外源ANP对阿勒泰羊尾脂脂肪细胞脂解的影响。选取健康10日龄阿勒泰羔羊,采集尾部脂肪组织,经胶原酶消化分离获得原代脂肪细胞,在体外条件下添加10mol/L ANP,利用CCK-8、油红O染色观察ANP对脂肪细胞增殖、分化的影响。更换诱导培养基诱导脂肪细胞分化成熟,收集对照组、诱导3 d、诱导6 d培养基上清用于测定生理生化指标(甘油、甘油三酯、游离脂肪酸)及ELISA法测定脂代谢相关指标;细胞样本提取RNA用于转录组测序及脂质代谢组学分析,并通过q RT-PCR验证转录组结果。结果显示:(1)经油红O染色后鉴定为脂肪细胞,生长曲线近似“S型,符合细胞基本生长规律,ANP处理后细胞增殖能力变强。(2)添加ANP后,相较于对照组,诱导3 d和诱导6 d甘油、游离脂肪酸、环鸟苷酸(c GMP)和激素敏感性脂肪(HSL)含量均极显著升高(P0.01);诱导3 d甘油三酯含量显著升高(P0.05);诱导6d脂肪酸合成酶(FAS)含量极显著升高(P0.01)。(3)基于转录组测序分析,共得到11310个差异表达基因,其中6093个上调基因,5217个基因下调,包括脂肪酸合成酶(FASN)、脂肪生成调节因子(ADIRF)、脂联素受体2(ADIPOR2)、脂滴包被蛋白3(PLIN3)、利钠肽受体1(NPR1)、激素敏感性脂肪酶(LIPE)等基因显著表达(P0.05)。GO功能显著富集到的生物过程包括免疫相关、磷酸化、细胞内物质运输等与细胞参与反应过程相关;细胞组分包括内质网、高尔基体等与蛋白质合成相关;分子功能包括受体结合、趋化因子及相关酶活性。KEGG显著富集在肿瘤坏死因子信号通路(TNF signaling pathway)、MAPK信号通路(MAPK signaling pathway)、AMPK信号通路(AMPK signaling pathway)等(P0.05)。(4)基于脂质组学分析,正负离子模式下共筛选得到514种差异代谢物,其中显著上调195种,显著下调133种(P0.05),其中包括磷脂类、鞘脂类、三酰甘油(TAG)等不同脂质类别中。综上所述,通过胶原酶消化法分离出阿勒泰羊尾脂原代脂肪细胞,且添加ANP后甘油、FFA、c GMP、HSL均有不同程度的增加;对脂代谢相关基因,KEGG信号通路,脂质代谢物产生显著影响,表明ANP参与了促进脂肪细胞脂解的代谢活动。