SIAH1介导YBX-1泛素化逆转上皮性卵巢癌化疗耐药

作     者：高吴江 

作者单位：江苏大学 

学位级别：硕士

导师姓名：朱小兰

授予年度：2022年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：SIAH1 YBX-1 上皮性卵巢癌 化疗耐药 泛素化 

摘      要：背景:化疗耐药的发生是上皮性卵巢癌(EOC)患者预后不良的重要原因。大量研究证明致癌基因YBX-1参与了上皮性卵巢癌的进展与化疗耐药,寻找靶向YBX-1的治疗措施将会为卵巢癌治疗提供新的方向。我们发现,YBX-1是新型E3泛素连接酶SIAH1的潜在底物,同时,SIAH1在耐药卵巢癌细胞中明显下调,这一现象提示我们其在化疗耐药方面的潜在意义。本研究旨在探讨SIAH1调节YBX-1蛋白稳定性逆转卵巢癌耐药的作用及机制。方法:1.采用免疫组化法检测卵巢癌耐药及敏感患者组织中SIAH1蛋白的表达量,免疫印迹法用于检测卵巢癌患者及正常人血清、卵巢癌耐药及敏感细胞系内SIAH1蛋白的表达。***试验、EDU试验、划痕试验、CCK-8试验用于评价SIAH1对卵巢癌细胞的侵袭、增殖、迁移和耐药能力的影响。3.通过构建SIAH1过表达及抑制异种移植瘤模型,验证SIAH1的体内化疗增敏效应。4.无标记泛素化蛋白液相色谱-串联质谱定量分析(LC-MS/MS)分析E3泛素连接酶SIAH1的潜在底物及泛素化位点。5.免疫印迹法、蛋白质半衰期、及蛋白酶体抑制剂应用后免疫印迹检测分析卵巢癌细胞内SIAH1对YBX-1蛋白量的影响。***实验、划痕实验、Transwell实验、CCK8检测、KI-67染色、TUNNEL染色用于证明YBX-1对卵巢癌细胞的侵袭、增殖、迁移、耐药和凋亡能力的影响,以及SIAH1对YBX-1蛋白的调节作用。7.通过蛋白质免疫印迹法、免疫共沉淀法和点突变等进一步确定SIAH1调控YBX-1蛋白降解的作用机制及作用位点。8.实时荧光定量PCR检测基因表达水平和RNA稳定性。9.体内试验验证SIAH1对卵巢癌的耐药调节作用与机制机制。结果:***1在卵巢癌组织中表达下调,并抑制卵巢癌细胞的增殖、侵袭、迁移和体外耐药性。***1增加卵巢癌细胞体内药敏性。***1与YBX-1相互作用并下调YBX-1的蛋白稳定性。***1促进YBX-1泛素化降解。***1通过其RING结构域泛素化YBX-1的304位赖氨酸。***1通过泛素化YBX-1间接下调m5C修饰的RNA的稳定性。***1通过泛素化YBX-1增加卵巢癌细胞体内药敏性。结论:E3泛素连接酶SIAH1在上皮性卵巢癌中低表达,可通过其RING结构域泛素化YBX-1的304位赖氨酸,诱导YBX-1蛋白泛素化降解,调节耐药相关基因E2F5/YY1/RCC2等m RNA的稳定性,增加卵巢癌细胞体内外药敏性。